Względna objętość komory kwasowej jako biomarker związany z lizosomalnym spichrzaniem ad

Ta ekspansja LE / Lys była obserwowana w każdym wieku w porównaniu z dopasowanymi wiekiem kontrolami i była wysoce znacząca w każdym punkcie czasowym zarówno w śledzionie jak i krążących limfocytach B (P <0,001). Wcześniej wykazaliśmy, że komórki B od Npc1. /. przechowywać wysokie poziomy glikosfingolipidów (GSL) mierzonych za pomocą HPLC (9). Kluczowym odkryciem było to, że obwodowe przechowywanie komórek B, jak wskazano przez MEFL, równolegle do progresywnego gromadzenia się gangliozydów i laktozyloceramidów w mózgu, jak zmierzono za pomocą HPLC (Figura 1, C i D), co wskazuje, że szybkość przechowywania w komórkach B w peryferyjne paralele do przechowywania w CNS. Sonda LipidTOX, która wykrywa przechowywanie fosfolipidów, wykryła fosfolipidy w kontroli i Npc1. /. Limfocyty B, ale nie wykazywały zwiększonego wybarwienia w Npc1. /. w stosunku do komórek B typu dzikiego (dodatkowa figura 1B, materiał dodatkowy dostępny online z tym artykułem; doi: 10,1172 / JCI72835DS1), a zatem nie był dalej oceniany. Ryc. Poziom ekspresji LE / Lys wzrasta progresywnie w komórkach B w mysim modelu choroby NPC1 i odpowiada szybkości przechowywania GSL w mózgu. (A i B) śledziony (A) i cyrkulujące (B) komórki B analizowano za pomocą cytometrii przepływowej przez cały okres żywotności Npc1 (3 /. myszy (3 tygodnie, przedobjawowe, 6 tygodni, wczesne objawy, 9 tygodni, późne objawy) i porównane z kontrolnymi Npc1 + / + typu dzikiego. Znacznik komórek B pan-B wykrywano stosując przeciwciało monoklonalne anty-CD19 skoniugowane z PE, a komórki pokryto kolorem zielonym Lysotracker. Analizę przeprowadzono na bramkowanych limfocytach B (CD19 +), a poziomy barwienia Lysotracker standaryzowano na fluorescencyjne mikrokulki sprzężone z określoną liczbą cząsteczek fluorescencyjnych / kulkami w celu linearyzacji danych logarytmicznych zebranych przez cytometr. W każdym punkcie czasowym występowało postępujące zwiększenie MEL komórek B w stosunku do poprzedniego punktu wieku (p <0,01, śledziona, wszystkie grupy wiekowe i krew, 6 i 9 tygodni). (C i D) Analiza GSL, przeprowadzona za pomocą HPLC, gangliozydu GM2 (C) i laktozyloceramidu (D) w przodomózgowiu 2, 4, 7 i 9-tygodniowego Npc1 (3 /. myszy w porównaniu z kontrolami typu dzikiego. ** P <0,01; *** P <0,001. Zatwierdzenie testu w próbkach krwi pacjenta. Test Lysotrackera został następnie zastosowany do limfocytów B krwi obwodowej od pacjentów z NPC. Chociaż test ten byłby w praktyce stosowany do monitorowania poszczególnych pacjentów w czasie, mieliśmy okazję tutaj ocenić ten biomarker na poziomie populacji. Stwierdziliśmy, że wartości MEFL były znacząco podwyższone w komórkach B od większości pacjentów z NPC1 w wieku dziecięcym (w wieku 0-12 lat, P <0,001, Figura 2A); tylko 4 przypadki w wieku 0 6 lat i 6 przypadków w wieku 7-12 lat pokrywają się z wartościami kontrolnymi. Dwóch infantylnych pacjentów z chorobą Tay-Sachsa miało również podwyższony poziom MEFL powyżej dopasowanego pod względem wieku zakresu kontrolnego. Najmłodsi chorzy na NPC1 ze znaczącymi objawami klinicznymi mieli najwyższe wartości MEFL (P <0,05, 0. 6 lat w porównaniu z 13. 18 lat; P <0,01, 0. 6 lat w porównaniu z. 19 lat). Przeciwnie, pacjenci dorośli NPC1 (z późniejszym początkiem i wolniejszym postępem choroby) i heterozygotyczni nosiciele nie różniły się znacząco od dopasowanych wiekowo kontroli na poziomie populacji (Figura 2A). Rycina 2 Zależna objętość LE / Lys określa dzieci z chorobą NPC1. Dane zebrano prospektywnie na pacjentach NPC1 (n = 97, w wieku od 2 miesięcy do 53 lat), heterozygotycznych nosicielach (NPC Het; n = 40, w wieku 23 do 76 lat), dobranym pod względem wieku grupie kontrolnej (n = 53, w wieku 4 miesięcy do 64 lata) i 2 dzieci z chorobą Tay-Sachsa (TS). (A) Wartości Lysotrackera z krążących komórek B zmierzono za pomocą cytometrii przepływowej i wykreślono względem wieku pacjenta. Każdy pacjent pojawia się tylko jeden raz, standaryzowany do pierwszej próbki analizowanej dla każdego pacjenta. *** P <0,01. (B) Kiedy ci sami pacjenci. dane wykreślono jako nieskorygowany wskaźnik nasilenia (z wyższą wartością oznaczającą większe obciążenie chorobą) w odniesieniu do wieku, zidentyfikowano wiele podgrup. Zostały one oznaczone zgodnie ze zmniejszającym się nasileniem, od najcięższego (podgrupa a) do najłagodniejszego (podgrupa f). Wskaźnik zmiany w skali roku jest wskazany dla każdej podgrupy. (C) Całkowity wskaźnik ciężkości (bez słuchu, ponieważ nie mierzono go we wszystkich ośrodkach klinicznych) dla każdego pacjenta podzielono według wieku pacjenta w celu wygenerowania ASIS. Gdy wykreślono go względem MEFL, stwierdzono statystycznie istotną korelację (P = 0,017). (D) Gdy poziom osoczowego cholesterolu w osoczu cholestanu-3a, 5a, 6a-triolu wykreślono względem ich wartości MEFL, statystycznie istotną korelację zaobserwowano u wszystkich pacjentów (P <0,01). Kawałek liniowy model znacząco poprawił dobroć dopasowania w odniesieniu do pojedynczego modelu liniowego (P <0,001); w tym modelu początkowe nachylenie było znaczące (P = 0,015), a drugie nie było (P = 0,228), a szacowany punkt zmiany wynosił 21 269 MEFL. Charakterystyka kohorty badania [podobne: kariotyp osoby z zespołem downa, królestwo pierożka, pompon komis ] [hasła pokrewne: deli 8, well done kraków, motochemia kraków ]