Względna objętość komory kwasowej jako biomarker związany z lizosomalnym spichrzaniem ad 7

Ci 2 pacjenci otrzymywali również, przez wstrzyknięcie do lędźwiowego dokarmiania, 175 mg HP (CD co 2 tygodnie, począwszy od października 2010 r. Pacjent 3 i 4 rozpoczęto od podania iv HP CD w grudniu 2010 r. I kwietniu 2011 r., Odpowiednio. Zwiększono ich dawkę do 2000 mg / kg, podawanych co tydzień. Pacjenci w wieku 5 i 6 lat rozpoczęli od podania dożylnego HP-CD w styczniu 2010 r. I rozpoczęli podawanie dooponowego HP-CD w maju 2010 r. W czasie pobierania próbek krwi otrzymywali iv HP-CD w dawce 2,900 mg / kg dwa razy w tygodniu. i dooponowe HP (CD) w dawce 875 mg co 2 tygodnie. Pacjent 7 uczestniczył w doustnym leczeniu miglustatem (2 lata) przed rozpoczęciem dokanałowego podawania HP pC i pozostawał na miglustat w trakcie leczenia HP pC. Pacjent 7 był leczony HP. CD co 15 dni i rozpoczynał podawanie 175 mg HP (3CD, które zwiększano w etapach pojedynczej dawki (175, 250, 300 i 350 mg) aż do dawki podtrzymującej 400 mg. Początkowo pacjent ten otrzymywał wszystkie dawki HP. CD przez nakłucie lędźwiowe z iv sedacją; przez ostatnie 6 miesięcy badania, HP (CD) dostarczano przez Ommaya do zbiornika dokanałowego. BMT pacjenta z NPC2. Pacjentka NPC2 prezentowała się jako noworodek z cechami hepatosplenomegalii i dysmorfii. Stworzyła postępujące opóźnienie neurorozwojowe i niewyjaśnioną chorobę płuc. W wieku 14 miesięcy zdiagnozowano NPC2 na podstawie wybarwienia fibroblastów skóry i analizy mutacyjnej filipiną. znaną mutację NPC2 zidentyfikowano bez znalezienia drugiej mutacji, z regionami intronowymi, które jeszcze nie zostały zsekwencjonowane. Pacjent pogarszał się i dlatego BMT wykonano w wieku 18 miesięcy z użyciem nienaruszonego dawcy-rodzeństwa, ponieważ skuteczność ostatnio odnotowano w innym przypadku NPC2 po BMT (18). Pobieranie próbek i analiza przed BMT w tym badaniu przeprowadzono przed kondycjonowaniem za pomocą leków immunosupresyjnych. Początkowo wyzdrowiała; jednakże chimeryzacja dawcy rozwinęła się po początkowej odpowiedzi (zmniejszona wartość MEFL), a ona klinicznie zmniejszyła się po 6 miesiącach. Została poddana powtórnemu przeszczepowi 9 miesięcy po początkowym BMT od tego samego dawcy i całkowicie wszczepiona, prowadząc do poprawy klinicznej. Pod koniec niniejszego badania pacjent był stabilny i podlegał ciągłemu przeglądowi. Pobieranie krwi ludzkiej i izolacja komórek jednojądrzastych. Krew żylną zebrano do probówek EDTA, utrzymywano w temperaturze pokojowej i analizowano w ciągu 72 godzin (optymalne dla utrzymania żywotności komórek, dane nie pokazane). Zgodę lub zgodę otrzymano od wszystkich podmiotów, z aprobatą etyczną obowiązującą w każdym ośrodku klinicznym. Próbki kontrolne otrzymano przez dobrowolne oddanie z wyraźną zgodą lub od dostawcy komercyjnego, gdy w momencie pobrania uzyskano świadomą zgodę / zgodę. Badacze byli zaślepieni na tożsamość pacjenta. Całą krew załadowano na Histopaque-1077 (Sigma-Aldrich), a komórki jednojądrzaste izolowano zgodnie z instrukcjami producenta. Jednojądrzastą frakcję przemyto dwukrotnie Dulbecco PBS (D-PBS) przed zliczeniem. Cytometrii przepływowej. Jednojądrzaste komórki (1 x 106, w dwóch powtórzeniach) inkubowano ze skoniugowanym z PE mysim przeciwciałem przeciw ludzkiemu CD19 (klon LT19, Abcam) w D-PBS przez 30 minut na lodzie w ciemności. Reakcję zatrzymano 100 | al 10% BSA i komórki wirowano (5 minut przy 800 g), następnie albo zawieszono ponownie w 0,5 ml buforu FACS (0,1% BSA, 0,02 M NaN3 w x PBS) lub wybarwiono ml 200 nM Lysotracker-green DND-26 (Invitrogen) w D-PBS przez 10 minut w ciemności w temperaturze pokojowej. Komórki odwirowano przez 5 minut przy 800 g, ponownie zawieszono w 0,5 ml buforu FACS i trzymano na lodzie przez maksymalnie godzinę przed analizą cytometrii przepływowej (BD Biosciences FACSCanto II). Cytometr kalibruje się za pomocą kulek do ustawiania i śledzenia cytometru (BD), a kompensację przeprowadza się stosując komórki wybarwione Lysotrackerem i kompozyty przeciw myszy (BD) barwione przeciwciałem PE z zastosowaniem oprogramowania FACSDiva (BD). Próbki pozyskiwano z bramkowaniem w warunkach singletowych (FSC-H versus FSC-A) i CD19 +. Łącznie zebrano 50 000 zdarzeń singletowych i 10 000 zdarzeń CD19 typu singlet gate. Średnią fluorescencję zdarzeń CD19 + obliczono przy użyciu oprogramowania FACSDiva (BD). MEFL obliczono stosując 8-pikowane kulki kalibracyjne Rainbow (BD) stosując równoważne wartości fluoresceiny dostarczone przez producenta. Szczegółowe informacje na temat profilu i analizy FACS znajdują się w Dodatkowej ilustracji 8. Analiza HPLC. Analizę HPLC GSL przeprowadzono zgodnie z wcześniej opublikowanymi metodami (24). Pomiary oksysteroli. Metodologia była zgodna z opublikowanymi protokołami (8). Pomiary lysotrackera i oksysteroli przeprowadzono na tych samych próbkach klinicznych dla każdego punktu danych. Statystyka. Do porównania proporcji użyto modeli regresji logistycznej, do porównania median użyto testów Wilcoxona-Manna-Whitneya i Kruskala-Wallisa, a do porównania średnich zastosowano ANOVA
[przypisy: pijalnia wódki i piwa kraków, legato motocykle, skierowanie do szpitala psychiatrycznego ]
[podobne: pod norenami, spaghetteria kobierzyńska, decoria galerie ]