Stabilny, utajony rezerwuar dla HIV-1 w spoczynkowych limfocytach T CD4 + u zakażonych dzieci czesc 4

Wyniki te potwierdzają istnienie tego komórkowego rezerwuaru u dzieci. Figura Reprezentatywna analiza cytometrii przepływowej ekspresji antygenu CD4 i HLA-DR na PBMC zubożonych w monocytach przed (a) i po (b) sekwencyjnym zmniejszaniem perełek magnetycznych i sortowaniem komórek. Częstość latentnie zakażonych spoczynkowych limfocytów T CD4 + i ich korelacja z poziomem RNA HIV-1 w osoczu i procentem limfocytów CD4 +. U dzieci jeszcze nieobecnych na HAART, częstości spoczynkowych limfocytów T CD4 + zawierających utajony, kompetentny pod względem replikacji wirus HIV-1 były na poziomie 4 log (0,3 (2503 na 106 spoczynkowych komórek CD4 +, średnia geometryczna = 10/10 6 komórek). Częstotliwości korelowały bezpośrednio z poziomem RNA HIV-1 w osoczu (r = 0,86, P <0,0001, Figura 2) i odwrotnie z odsetkiem limfocytów CD4 + (r = 0,060, P <0,005). Test hodowlany stosowany do wykrywania utajonego HIV-1 może wykrywać komórki w stanie opóźnienia przed zaplombowaniem i komórki w bardziej stabilnym stanie opóźnienia po integracji. Wcześniejsze badania u dorosłych sugerują, że u pacjentów z wiremią większość wirusa obecnego w spoczynkowych limfocytach T CD4 + znajduje się w stanie opóźnienia w okresie wstępnym (23, 33). Bezpośrednia korelacja między poziomami RNA HIV-1 w osoczu a częstotliwością latentnie zakażonych spoczynkowych komórek CD4 + pokazanych na Figurze 2 sugeruje, że gdy ładunek wirusa spada do granicy wykrywalności najbardziej czułych testów (20 kopii / ml), to częstotliwość latiennie zainfekowanych komórek powinna wynosić 0,03 IUPM lub mniej. Jednakże, jak pokazano poniżej, częstotliwość latentnie zakażonych komórek pozostaje powyżej 0,1 IUPM nawet u dzieci, które wykazywały długotrwałą supresję replikacji wirusa na HAART. Wynika to z udziału komórek ze stabilną, zintegrowaną formą DNA HIV-1. Figura 2Korelacja między częstotliwością latentnie zakażonych spoczynkowych komórek T CD4 (IUPM) a RNA HIV-1 w osoczu (kopie / ml). Zamknięte symbole przedstawiają dzieci, które miały wykrywalny poziom RNA HIV-1 w osoczu przy wejściu do badania. Otwarte symbole przedstawiają dzieci, które miały niewykrywalne (<400 kopii / ml) poziomy RNA HIV-1 w osoczu w momencie wejścia do badania. Wartości są arbitralnie wykreślane przy górnej granicy testu na obecność wirusa plazmowego przy 400 kopii / ml. Wpływ HAART na częstość latentnie zakażonych spoczynkowych limfocytów CD4 +. Analiza podłużna wpływu HAART na wielkość i rotację puli spoczynkowo zakażonych spoczynkowych limfocytów CD4 + została przeprowadzona u 6 dzieci (pacjentów 7, 10, 11, 14, 15 i 21), którzy byli testowani przed i po inicjacji HAART. Zaobserwowano uderzający 2-fazowy spadek częstotliwości latentnie zakażonych spoczynkowych limfocytów CD4 + (Figura 3a). W ciągu do 3 miesięcy od rozpoczęcia HAART częstotliwość latentnie zakażonych spoczynkowych limfocytów CD4 + zmniejszyła się o log lub więcej. Szybki początkowy spadek odsetka komórek spoczynkowych z utajonym HIV-1 prawdopodobnie wynika z rozpadu labilnej postaci preintegracyjnej wirusa HIV-1 w niedawno zakażonych, spoczynkowych limfocytach T CD4 + (23, 33, J. Blankson i RF Siliciano, niepublikowane dane). Czterech z 6 dzieci (pacjentów 7, 10, 11, 12 i 14) utrzymywało supresję replikacji wirusa (<400 kopii / ml) przez rok lub dłużej na HAART. Wszystkie 4 dzieci miało obniżenie odsetka CD8 (zakres 6. 12% spadek). U tych 4 dzieci, w ciągu do 8 miesięcy leczenia HAART, trudno było hodować HIV-1 w lub więcej punktach czasowych, stosując standardowe wejście 2,5 miliona oczyszczonych spoczynkowych komórek T CD4 +. Wynik ten odzwierciedla fakt, że częstotliwość spoczynkowych komórek T CD4 + ze stabilną formą infekcji latentnej jest niska i zbliżona do granic wykrywalności testu. Aby ustalić, że HIV-1 utrzymywał się w tym przedziale u dzieci, które utrzymywały supresję replikacji wirusa, ważne było uzyskanie wyższych liczb wejściowych spoczynkowych limfocytów T CD4 + do analizy hodowli. Ze względu na ograniczenie ilości krwi, jaką można uzyskać od dzieci, zwiększenie liczby wejściowych spoczynkowych limfocytów T CD4 + wymagało użycia komórek oczyszczonych za pomocą samego ubytku kulek magnetycznych (czystość 90%). Odpowiedni pod względem replikacji HIV-1 odzyskano u wszystkich 4 dzieci po 9-12 miesiącach stosowania HAART, stosując wyższe liczby wejściowe spoczynkowych komórek. Jest mało prawdopodobne, aby wykryty wirus był obecny w niewielkiej liczbie zanieczyszczających aktywowanych komórek T, ponieważ częstotliwość zakażonych aktywowanych komórek T CD4 + jest również bardzo niska (12, 23). W powtórnej analizie, po 12-15 miesiącach HAART, kompetentny pod względem replikacji HIV-1 można było łatwo odzyskać z wysoce oczyszczonych (> 98%) spoczynkowych limfocytów T CD4 + u każdego z 4 dzieci, zapewniając ostateczne potwierdzenie, że HIV-replikacja jest kompetentny. utrzymywały się w spoczynkowych limfocytach T CD4 + u tych pacjentów pomimo 12-15 miesięcy HAART. Rycina 3Decay na temat częstotliwości latentnie zakażonych spoczynkowych limfocytów T CD4 + (w IUPM) w stosunku do czasu na HAART w miesiącach
[przypisy: moja historia odchudzania, motochemia, pompon komis ]
[hasła pokrewne: deccoria galerie, genji sushi, królestwo pierożka ]