SS-56, nowy komórkowy cel odpowiedzi autoprzeciwciał w zespole Sjögrena i układowym toczniu rumieniowatym ad 5

Ponadto, próby ustanowienia aktywności wiążącej DNA dla białka rSS-56 były wielokrotnie nieskuteczne. Można to również przypisać brakowi odpowiedniej konformacji rekombinowanego SS-56 wytwarzanego w bakteryjnym układzie ekspresyjnym. Korzystając z pośredniej mikroskopii immunofluorescencyjnej, zajęliśmy się subkomórkową lokalizacją białka SS-56 w komórkach HeLa (Figura 4b). Silne cytoplazmatyczne i bardzo ostre okołowiejące barwienie obserwowano, gdy zastosowano surowice odpornościowe SS-56, ale nie normalną surowicę mysią (Figura 4a). Obserwowano również słabe zabarwienie w jądrach niektórych komórek; jednak stwierdzono, że większość SS-56 znajduje się w cytoplazmie. Te dane zostały również potwierdzone na komórkach HeLa, które przejściowo transfekowano plazmidem eksprymującym SS-56 połączonym z GFP i konsekwentnie obserwowano dominujące barwienie cytoplazmatyczne (dane nie pokazane). Figura 3 Analiza Western blot z użyciem mysiej poliklonalnej antysurowicy przeciwko SS-56. Rekombinowane białko His-SS-56 (1 .g / ścieżkę) (a) lub różne ekstrakty pełnych komórek (130 .g / ścieżkę) (b i c) poddano immunoblottingowi z surowicą odpornościową (linia 1), anty-SS-56 surowica (linia 2) lub surowica anty-SS-56 zaabsorbowana rekombinowanym białkiem (linia 3). Figura 4 Komórkowa lokalizacja SS-56 w komórkach HeLa. Komórki inkubowano z mysią surowicą preimmunizowaną (a) lub surowicą anty-SS-56 (b) i barwiono jodkiem propidyny (czerwone jądra w II) po inkubacji z przeciwciałami Ig anty-mysi znakowanymi FITC. Reaktywność wizualizowano dla FITC (zielony w I) lub dla FITC i jodku propidyny (żółty w III) w celu określenia subkomórkowego rozkładu SS-56. Wykrywanie przeciwciał przeciwko SS-56 w surowicy pacjentów z SS lub SLE. Ze względu na homologię sekwencji między SS-56 a białkiem Ro / SSA-52, zajęliśmy się kwestią, czy SS-56 może służyć jako autoAg w pewnych zaburzeniach autoimmunologicznych, które charakteryzują się obecnością przeciwciał przeciwko SSA i SSB antygeny. Zatem, surowice od pacjentów z SS lub SLE i surowic od zdrowych kontrolnych analizowano, najpierw za pomocą testu ELISA przeciwko SS-56, a następnie za pomocą ELISA wobec każdego z trzech innych białek rSSA-52, rSSA-60 i rSSB-48 (Tabela 1). ). Zarówno pacjenci SS, jak i SLE wykazywali znacząco wyższe przeciwciała anty-SS-56 niż zdrowi kontrole. Poziomy przeciwciał przeciwko białkom SSA i SSB były również wyższe w obu grupach pacjentów, chociaż różnica nie osiągnęła istotności statystycznej (P> 0,05) odpowiednio dla SSB-48 i SSA-52, dla SS i pacjentów z SLE (Tabela 1). Biorąc wartość odcięcia surowicy w stosunku do konkretnego antygenu jako średnią . 2 SD wartości absorbancji od zdrowych osób z grupy kontrolnej, odpowiednio 64% i 68% pacjentów z SS i SLE było pozytywnych dla anty-SS- 56 przeciwciał. Przeciwnie, tylko 8% zdrowych kontroli dawało wartości, które były wyższe niż średnia + 2 SD w grupie. Odsetek pozytywnych pacjentów w stosunku do innych białek rSSA i rSSB wahał się między 20% a 48%, jak pokazano w Tabeli 1. Ponadto, gdy średnią . 3 SD wartości ze zdrowych kontroli przyjęto jako punkt odcięcia, 32 odpowiednio% i 54% pacjentów z SS i SLE, ale żadna ze zdrowych osób kontrolnych, nie uzyskała pozytywnej odpowiedzi na SS-56. Następnie wybraliśmy do analizy 13 pacjentów z SS i 12 SLE, którzy zostali zgłoszeni przez szpital (zgodnie z wynikami z techniki ID) jako negatywne zarówno dla przeciwciał SSA, jak i SSB. Wartości absorbancji ELISA dla tych 25 próbek wobec czterech rekombinowanych białek przedstawiono na Figurze 5. Przyjmując jako punkt odcięcia dla każdego z badanych antygenów średnią . 2 SD wartości absorbancji z grupy zdrowych kontroli, żaden z 25 testowanych surowic okazało się pozytywnych w teście ELISA przeciwko SSB-48. Dla kontrastu, dwóch z 13 i dwóch z 12 pacjentów, odpowiednio z SS i SLE, było pozytywnych wobec SSA-60. Częstość występowania pozytywnego wpływu na SSA-52 była taka sama wśród pacjentów z SLE (dwóch z 12) i nieco wyższa (czterech z 13) wśród pacjentów SS. Co zaskakujące, ośmiu z 13 pacjentów z SS i ośmiu z 12 pacjentów z SLE wykazało wartości absorbancji przeciwko SS-56, które były powyżej punktu odcięcia. Ponadto wśród 17 pacjentów z obu grup, którzy nie wykazywali wykrywalnych przeciwciał przeciwko antygenowi SSA i SSB, za pomocą ELISA lub ID, dziewięć (53%) miało mierzalne przeciwciała przeciwko SS-56. Wyniki te jasno pokazują, że przeciwciała anty-SS-56 nie są po prostu antyreagującymi przeciwciałami z anty-SSA-52 lub anty-SSA-60, ale reprezentują odmienną populację przeciwciał. Zostało to dodatkowo potwierdzone przez brak zahamowania wiązania pacjentów. surowice do studzienek opłaszczonych SS-56a po równoczesnym dodaniu 5 .g / ml SSA-52 lub SSA-60
[więcej w: motochemia, najtańsze apteki internetowe, węglowodany złożone tabela ]
[hasła pokrewne: pod norenami, spaghetteria kobierzyńska, decoria galerie ]