Spontaniczne zapalenie nerwu wzrokowo-kręgowego mózgu w modelu transgenicznego mysiej autoimmunizacji komórek T / komórek B czesc 4

5C pokazuje, że kombinacja komórek T i B reagujących z MOG z pojedynczych transgenicznych myszy TCRMOG i IgHMOG w pełni oddawała wysoką reaktywność nieseparowanych splenocytów mysich z podwójnie transgenicznym OSE. Przeciwnie, transgeniczne komórki T z myszy TCRMOG w połączeniu z nietransgenicznymi komórkami B i transgenicznymi komórkami B od myszy IgHMOG razem z nietransgenicznymi komórkami T wykazywały porównywalne odpowiedzi proliferacyjne (Figura 5C). Wreszcie, mieszanie wysoko oczyszczonych transgenicznych komórek T i B z myszy OSE przywróciło wzmocnioną kinetykę proliferacji nierozdzielonych splenocytów OSE (Suplemental Figura 5B). Udział transgenicznych limfocytów T lub B w odpowiedzi proliferacyjnej rMOG określono przez znakowanie splenocytów OSE za pomocą CFSE i wystawienie ich na optymalne dawki antygenu in vitro. Zarówno komórki T, jak i B uległy proliferacji (Figura 5D). Ponadto aktywowano obie odpowiadające populacje limfocytów. Komórki T wyrażały CD25, a komórki B CD86, jako markery aktywacyjne (dodatkowa Figura 6). Cytokiny wydzielane przez stymulowane MOG splenocyty z myszy OSE in vitro mierzono za pomocą testu ELISA. Głównie, cytokiny IL-2, IFN-a i IL-17 (choć w mniejszym stopniu) zostały uwolnione z komórek T OSE i TCRMOG w układzie dawka-odpowiedź wcześniej znalezionym w testach proliferacji. W przeciwieństwie do tego, IL-4 był tylko nieznacznie wykrywalny w supernatantach, podczas gdy niskie poziomy IL-5 były obserwowane w odpowiedziach na OSE, ale nie na hodowle T TCRMOG T (Figura 6A). Podczas gdy stymulacja wysokimi dawkami MOG aa35-55 peptydów uwalniała cytokiny IL-2, IFN-a, IL-17 i IL-5 ze splenocytów OSE, niskie dawki peptydów nie wyzwoliły żadnego wykrywalnego wydzielania cytokiny (Figura 6B). Figura 6 Produkcja cytokin przez transgeniczne splenocyty in vitro. (A i B) Splenocyty z myszy OSE, TCRMOG i IgHMOG stymulowano rosnącymi ilościami (A) rMOG lub (B) MOGa a 35 35 peptydu i wydzielano IFN-a, IL-2, IL-4, IL -5, a cytokiny IL-17 wykryto za pomocą testu ELISA. Przedstawiono reprezentatywne wyniki łącznie 7 zwierząt z OSE, 3 TCRMOG i 3 IgHMOG analizowanych podczas 3 niezależnych eksperymentów. Paski błędów wskazują SEM. Produkcja autoprzeciwciał przeciw-MOG. Myszy OSE, z EAE lub bez EAE, nie różniły się istotnie liczbą bezwzględną i składem komórkowym splenocytów (Tabela uzupełniająca 1) lub komórkową (dane nie pokazane). W szczególności zdolność swoistych dla MOG transgenicznych komórek B do wiązania rMOG pozostawała niezmieniona podczas pojawiania się i progresji choroby. Wreszcie, kinetyka proliferacji i ekspresja markerów aktywacji komórek T i B, jak również ilość i jakość cytokin wydzielanych przez splenocyty transgeniczne w odpowiedzi na rMOG pozostały niezmienione przez stan kliniczny zwierząt z OSE (nasze niepublikowane obserwacje). Jednakże, myszy OSE różniły się uderzająco od dopasowanych wiekowo pojedynczych transgenicznych myszy IgHMOG lub podwójnie transgenicznych TCROVA x IgHMOG przez ich wysokie miana izotypu IgG1 autoprzeciwciała przeciw-MOG (Figura 7). Podczas gdy myszy transgeniczne TCRMOG nie spontanicznie rozwijały żadnych przeciwciał anty-MOG (Suplementowa Figura 7), większość autoprzeciwciał przeciw-MOG w pojedynczym transgenicznym IgHMOG i myszach TCROVA x IgHMOG stanowiły IgM. Figura 7 Sporeatywne stężenia przeciwciał IgG swoistych dla MOG w surowicy u myszy transgenicznych. Przeciwciała wiążące MOG wykryto za pomocą testu ELISA w seryjnie rozcieńczonych surowicach uzyskanych od zdrowych (n = 6) i chorych (n = 7) OSE, zdrowych IgHMOG (n = 6), zdrowych TCROVA × IgHMOG (n = 6) i zdrowych OSE × MOG. /. (n = 3) myszy. Surowice (rozcieńczone przy 10 (. 2, 5 x 10 2, 2,5 x 10 3 i 1,25 x 10 4) inkubowano z płytkami wstępnie powleczonymi rMOG. Związane przeciwciała anty-MOG Ig wykryto przez swoiste dla allotypu przeciwciała rozpoznające IgMa (A), IgGla (B) lub IgG2a / ba (C). Przedstawiono średnią absorbancję przy OD 405 nm; słupki błędu wskazują SEM. Początek klinicznego EAE nie wpływał na poziom lub charakter przeciwciał anty-MOG IgG1 (Figura 7). Ponadto, badania podłużne poszczególnych myszy OSE wykazały stałe ilości specyficznych dla MOG przeciwciał IgM, IgG1 i IgG2 (patrz dodatkowa Figura 7). Wreszcie, myszy OSE, które nie miały antygenu MOG (tj., Potrójnie transgeniczne zwierzęta TCRMOG x IgHMOG x MOG3 / y) wykazywały zwiększone ilości przeciwciał surowicy anty-MOG IgG1, co wskazuje, że ich wytwarzanie odbywało się niezależnie od antygenu MOG (Figura 7). Omówienie Opisany tutaj dwuskładnikowy model EAE myszy OSE wyróżnia się pod kilkoma względami. Zapalna choroba demielinizacyjna rozwinęła się spontanicznie, wynikała z patogennej interakcji między mielinową komórką autoimmunologiczną T i B, a dystrybucja i skład komórkowy jej zmian przypominał chorobę Devic, odmianę ludzkiego SM. Spontanicznie rozwijające się specyficzne dla narządów choroby autoimmunologiczne u gryzoni występują rzadko
[patrz też: biustonosz sportowy nike, enterococcus faecalis w moczu, skierowanie do szpitala psychiatrycznego ]
[przypisy: studio urody 11, vanilla komis, cukiernia michalscy ]