Spontaniczne zapalenie nerwu wzrokowo-kręgowego mózgu w modelu transgenicznego mysiej autoimmunizacji komórek T / komórek B cd

(E) Bramkowany CD4. CD3. Komórki CNS barwiono anty-CD11b i anty-B220 w oddzielnej reakcji. (F) Komórki T CD4 + CD3 + infiltrujące OUN chorych myszy OSE głównie wyrażały patogenny TCR złożony z łańcuchów V3.23 i Vs11. Liczby wskazują procent wybarwionych komórek w odpowiednim kwadrancie. Dane cytometrii przepływowej są reprezentatywne dla 7 chorych zwierząt z OSE analizowanych w 4 niezależnych eksperymentach. Należy zauważyć, że limfocyty T CD4 + CD3 + z OUN chorych myszy OSE wykazywały wysoce aktywowany fenotyp wskazany przez markery CD69 i CD25 (Figura 3D), jak również CD44 (dane nie pokazane). Przeciwnie, CD3 i CD62L (dane nie pokazane) były częściowo obniżone. Komórki T śledziony od tych samych chorych OSE nie były aktywowane (Figura 3B). Ekspresja cytokin i chemokin w uszkodzeniach OUN. Ilościową PCR w czasie rzeczywistym użyto do porównania transkrypcji cytokin i chemokin w rdzeniach kręgowych zwierząt z OSE spontanicznymi myszami EAE i WT C57BL / 6 z aktywnie indukowanym EAE. Oba profile były prawie identyczne. Geny cytokinowe IFN-y i TNF-a były znacząco wzmocnione, podczas gdy transkrypty IL-4, IL-5, IL-10, IL-13 i IL-17 pozostawały praktycznie niewykrywalne (figura 4). U zdrowych pojedynczych transgenicznych miotów TCRMOG i IgHMOG żaden z tych transkryptów. zostały znalezione. Figura 4 Środowisko mikrodokina w rdzeniach kręgowych chorych myszy z OSE. Względny poziom ekspresji różnych genów cytokin i chemokin oceniano za pomocą ilościowej PCR w rdzeniach kręgowych chorych myszy OSE (n = 5, ocena kliniczna 3), zdrowych myszy IgHMOG (n = 3), zdrowych myszy TCRMOG (n = 3) i myszy C57BL / 6 immunizowane MOGa a 35 35 (n = 3, ocena kliniczna 3). Słupki błędu reprezentują SEM z pomiaru poszczególnych zwierząt w każdej grupie eksperymentalnej. ND, nie wykryto ekspresji genu. Chemokiny IP-10 i eotaksyna ulegały transkrypcji na podobnych wysokich poziomach u chorych zwierząt z OSE i myszy C57BL / 6 z EAE wywołanym przez MOG aa35-155 (Figura 4). Zwiększona odpowiedź anty-MOG i wytwarzanie cytokin przez limfocyty z myszy OSE. Komórki śledziony z myszy OSE reagowały na rekombinowane MOG aa1 (125 (rMOG) o wiele bardziej wydajnie niż pojedyncze kontrolne komórki TCRMOG (Figura 5A). Dawki antygenu wynoszące 0,02 .g / ml powodowały masową proliferację splenocytów podwójnych transgenicznych, podczas gdy komórki transgeniczne TCRMOG wymagały ponad 100-krotnego stężenia białka. Pojedynczo-transgeniczne splenocyty IgHMOG ledwie lub słabo reagowały na rMOG, nawet przy wysokich stężeniach (Figura 5A). Figura 5 Udoskonalona autoreaktywność limfocytów od myszy OSE do rMOG. (A i B) Proliferacja splenocytów pochodzących z OSE, pojedynczych transgenicznych myszy TCRMOG i IgHMOG w odpowiedzi na wzrastające stężenia (A) rMOG i (B) MOGa a35 35 peptydu. (C) Proliferacja komórek T CD4 + i komórek B izolowanych z myszy transgenicznych IgHMOG i TCRMOG, które połączono jak wskazano po ich oczyszczeniu (czystość> 90%) i stymulowano rosnącą ilością rMOG. Należy zauważyć, że połączenie M-reaktywnych komórek T i B spowodowało znaczny wzrost proliferacji w odpowiedzi na rMOG, porównywalny do splenocytów OSE. (D) Splenocyty myszy OSE znakowano CFSE i stymulowano optymalnymi stężeniami rMOG in vitro. Przedstawiono rozcieńczenie komórkowej CFSE z powodu proliferacji limfocytów T CD4 + CD3 + z bramką na żywo (na górze) i limfocytów CD19 + B bramkowanych na żywo (na dole). Splenocyty pozostające bez bodźca są reprezentowane przez linie kropkowane. W A (C, każdy punkt danych był uruchamiany trzykrotnie, a słupki błędu wskazują SEM. Eksperymenty w A i B były replikowane przy wielu okazjach (> 10), te w C i D były dwukrotnie powtarzane. W ostrym kontraście, immunodominujący peptyd MOG aa35a5 został rozpoznany w równym stopniu przez OSE i myszy sam-transgeniczne TCRMOG (Figura 5B). Obydwa wymagały stosunkowo wysokich stężeń peptydu dla mierzalnej aktywacji, podczas gdy komórki śledziony z myszy transgenicznych IgHMOG całkowicie nie reagowały na MOG aa35 <55. W początkowej próbie wyjaśnienia względnego udziału komórek T i B reagujących z MOG ze zwiększoną reaktywnością komórek śledziony OSE, pojedyncze transgeniczne splenocyty IgHMOG zmieszano z komórkami z pojedynczych transgenicznych śledzion TCRMOG. Kombinacja obu populacji transgenicznych potwierdziła reaktywność rMOG (patrz Dodatkowa Figura 5A). Podobny efekt supra-addytywny został uzyskany dzięki połączeniu oczyszczonych komórek B i T (> 90% w analizie sortowania komórek aktywowanych fluorescencyjnie [FACS]) z pojedynczej transgenicznej TCRMOG i IgHMOG śledziony
[przypisy: grudziądz jednostka wojskowa, sos brokułowy do makaronu, fishing24 ]
[więcej w: pod norenami, spaghetteria kobierzyńska, decoria galerie ]