Rozszerzająca się depresja korowa aktywuje i podwyższa MMP-9 czesc 4

Zmniejszono również antygen bariery śródbłonka (EBA) (n = 4). Jak przewidywano, zonula occludens-1 (ZO-1), ścisłe białko łączące, kolokalizowane ze szczurzym markerem komórek śródbłonka (RECA). Jednak po CSD zmalało (rys. 6B, n = 4). Wyniki te sugerują, że CSD może wpływać na białka ważne dla funkcji BBB. Figura 6CSD zmieniła immunobarwienie lamininy, ZO-1 i EBA w ścianie naczynia krwionośnego. (A_C) Laminina (przybliżona masa cząsteczkowa, 200 kDa), białko błony podstawnej, była redukowana po stronie bocznej do CSD na immunoblotach (po 12 godzinach) w porównaniu z grupą pozorowaną i porównywana z tą po stronie przeciwnej. Podobnie, CSD zmniejszyło immunobarwienie lamininy w naczyniach krwionośnych (C), co wskazuje, że CSD zmienia antygenowość integralnego białka błony podstawnej (pręty skali: 100 .m). (B) Te obrazy pokazują kolokalizację białka zaciśniętego złącza ZO-1 z RECA i pokazują, że CSD zmniejsza zasięg tej kolokalizacji (współczynnik kolokalizacji, 0,21. 0,03 dla CSD wobec 0,55. 0,05 dla kontroli; P <0,05). W porównaniu z obrazem po przeciwnej stronie (nCSD), połączony obraz po CSD pokazuje duże segmenty naczyń krwionośnych tylko z zieloną fluorescencją (strzałki, paski skali: 20 .m). (C) Immunobarwienie EBA było również zmniejszone w korowych naczyniach krwionośnych po CSD. Spadek ten często wskazuje na zaburzenie funkcji BBB (pręty skali: 100 .m). Żywy barwnik błękitu Evansa wiąże się ściśle z albuminą, a ten kompleks jest wykluczony z krzyżowania nietkniętego BBB. W związku z tym zbadaliśmy wyciek błękitu Evansa w mózgu po CSD i wykryliśmy ten znacznik w zwiększonych ilościach w homogenatach mózgu w ciągu 3. 24 godzin, w porównaniu z wyciekiem w grupie pozorowanej i po stronie innej niż CSD (Figura 7A; n = 5 za punkt czasowy). Niebieskie błękity Evansa były wyraźnie widoczne wokół naczyń krwionośnych. Wyciek naczyniowy błękitu Evansa stwierdzono po obu stronach (CSD i nie-CSD) po 12 godzinach, ale liczba naczyń barwiących była większa po stronie CSD (CSD, 19. 1,5, w porównaniu z CSD, 7. 0,6; Figura 7B). Różnice między dwiema stronami stwierdzono także za pomocą ilościowych pomiarów flourometrycznych (Figura 7A). Niebieski wyciek Evansa był długotrwały i obserwowano go, gdy ten znacznik został wstrzyknięty 21 godzin po CSD (Figura 7C). Ponadto obrzęk rozwijał się w obrębie szarej istoty korowej z czasem odpowiadającym wyciekowi albuminy (Figura 7D). Wielkość obrzęku w istocie szarej korowej (około 3,0- 4,6% powyżej kontroli) była mniejsza niż 6. 9% odnotowane w korze po niedokrwieniu (27, 28). Figura 7CSD powoduje wyciek błękitu Evansa i obrzęk w korze mózgowej. (A) Evans blue wstrzyknięto 15 minut przed wystąpieniem CSD. Żywy barwnik (błękit Evansa) został wyekstrahowany z tkanek korowych we wskazanych punktach czasowych. Wystąpiła statystycznie istotna różnica (*, patrz poniżej) między wyciekiem do kory CSD a grupą pozorów lub stroną kontralateralną. (B) Białka osocza wyciekają z korowych naczyń krwionośnych po CSD. Liczbę naczyń (> 10 .m średnicy), w których wykryto wyciek zarówno na korze CSD, jak i nie-CSD (przeciwstronnej) przedstawiono dla sześciu zwierząt (P <0,05). Obrazy konfokalne pokazują jedno naczynie przeciekające niebieski Evans po stronie CSD i nie przeciekające naczynie po stronie innej niż CSD (pręty skali: 100 .m). (C) Niebieski wyciek Evansa był długotrwały. Po wstrzyknięciu w 21 godzin po CSD, 3 godziny później wykryto istotny barwnik w korze CSD i był on wyższy niż kory pozornej i strony innej niż CSD (n = 5; P <0,05). (D) CSD powodowało zależny od czasu wzrost obrzęku, wyrażony jako procent masy mózgu (wilgotno-suche / mokre). Po 3, 6 i 24 godzinach obrzęk mierzony w korze gruszkowatej zwiększył się po stronie CSD w porównaniu z obrzękiem nie-CSD i grupą pozorowaną. Gwiazdka oznacza znaczącą różnicę w porównaniu z korą przeciwstronną lub grupą pozorowaną w A_D; P <0,05. Aby odnieść się do roli zwiększonej aktywności MMP-9 na indukowany przez CSD wyciek znacznika, podawaliśmy inhibitor metaloproteazy GM6001 i odkryliśmy, że całkowicie zablokował on obecność błękitu Evansa w mózgu 12 godzin po CSD (Figura 8, współczynnik CSD / nie-CSD 2,2 a 0,3 wobec 0,95 . 0,18 po leczeniu związkiem i lekiem, n = 5 na grupę, P <0,05), ale nie wpłynęło to na elektrofizjologiczne właściwości CSD. Wstępne wyniki z zastosowaniem BB94, nieselektywnego inhibitora metaloproteazy, potwierdziły te wyniki (danych nie przedstawiono). Fig. 8 Przeciek indukowany białkiem osocza wywołany CSD został zahamowany po hamowaniu MMP lub po CSD u myszy pozbawionych ekspresji genu MMP-9. Niebieski wyciek Evans jest blokowany przez nieselektywny inhibitor metaloproteazy GM6001 (65 mg / kg dootrzewnowo, podawany godzinę przed i 4 godziny po CSD), gdy jest badany w ciągu 12 godzin, w porównaniu do zwierząt traktowanych podłożem (n = 5 na grupę; * P <0,05 vs [patrz też: grudziądz jednostka wojskowa, pompon komis, kariotyp osoby z zespołem downa ] [hasła pokrewne: trufla kraków, nova krova, pod norenami ]