Rozszerzająca się depresja korowa aktywuje i podwyższa MMP-9 cd

Pojedynczy CSD zwiększał aktywność żelatynolityczną w naczyniach krwionośnych badanych 15. 30 minut po CSD (48. 6 w porównaniu z 77. 8 dodatnimi naczyniami krwionośnymi odpowiednio po stronie przeciwległej i CSD, P <0,05). Po 3 godzinach aktywność rozszczepiająca żelatynę była obecna w komórkach (blaszka II. IV; n = 4) w obrębie odcinków od kory typu piriform do potylicy, ale była szczególnie widoczna w obrębie kory gruszkowatej (ryc. 4). Po 6 godzinach, 12 godzinach (danych nie pokazano, n = 4) i 24 godzinach (Figura 4B, n = 4), fluorescencyjny produkt znaleziono w komórkach, pia arachnoid i naczyniach krwionośnych (Figura 4, C = E). Aktywność w hipokampie była silna obustronnie zarówno w grupie pozorowanej, jak i eksperymentalnej, zgodnie z wcześniej opisaną konstytutywną ekspresją MMP (26), a aktywność ta nie zwiększyła się po CSD. Prawie cała fluorogenna aktywność rozszczepiająca została zablokowana przez preinkubację skrawków tkanki za pomocą chelatora cynku (1,10-fenantroliny) przez 15 minut (nie pokazano), potwierdzając specyficzność tej reakcji. Po wstrzyknięciu inhibitora metaloproteazy, GM6001, aktywność żelatynowa in situ zmniejszyła się w neuronach, oponach i przebijających naczyniach krwionośnych zbadanych 12 godzin później (danych nie pokazano). Figura 4CSD zwiększała in situ aktywność żelatynolityczną w korze mózgowej z CSD. (A_E) Aktywność pojawiła się jako zielony fluorescencyjny produkt i rozwinęła się po inkubacji przekrojów wieńcowych (10 .m grubości) z fluorogennym substratem DQ żelatyny. Zwiększoną aktywność żelatynolityczną wykrywano po 3 godzinach (A) i 24 godzinach (B). Obraz w C reprezentuje większe powiększenie obszaru pudełkowego w A (pasek skali: 100 .m). C wykazuje aktywność żelatynolityczną w penetrujących naczyniach krwionośnych (pojedyncza strzałka) oraz pia pajęczynówki (przeciwne strzałki). (D i E) Aktywność wizualizuje się w naczyniu krwionośnym (strzałka) wyciętym w przekroju (D) oraz w naczyniu (strzałka) pokazującym fałdy (E). Pręty skali: 20 m. Aktywność żelatynolityczną hamowano przez preinkubację z 1,10-fenantroliną (nieselektywnym chelatorem cynku) (dane nie pokazane). (F) In situ aktywność żelatynolityczną obserwowano wokół naczyń krwionośnych już od 30 minut do godziny po pojedynczym CSD, a liczba znakowanych naczyń była znacząco wyższa po stronie CSD niż po stronie nie CSD lub w leczeniu pozorowanym. zwierzęta (* P <0,05 w porównaniu z bokami nienależącymi do CSD lub kory pozorne w prawej i lewej półkuli). Aktywność żelatynolityczną stwierdzono głównie w dużych, penetrujących naczyniach trójdzielnych (o średnicy> 20 .m), a także w błonach tkankowych w pia i pajęczynach. Aby zidentyfikować typy komórek wyrażające aktywność rozszczepiającą żelatynę, wybarwiamy kolejno pojedyncze sekcje zarówno dla aktywności rozszczepiania żelatyny, jak i ekspresji antygenów specyficznych dla komórki (Figura 5; n = 5). Figura 5A pokazuje, że większość aktywności żelatynolitycznej była obecna w neuronach i była wizualizowana w ścianach naczyń krwionośnych. Stwierdzono tylko nieczęste kolokalizacje między kwaśnym włóknistym białkiem glejowym (GFAP), markerem astrocytarnym i działaniem rozszczepiającym żelatynę. Szczególnie widoczny przykład pokazano na rysunku 5B. Kolokalizacja była również niezbyt częsta w komórkach śródbłonka (Figura 5C) i komórkach mięśni gładkich (Figura 5D). Wyniki nie różniły się, gdy skrawki optyczne o grubości 1,8 – 5,1 .m zostały zbadane za pomocą laserowej mikroskopii konfokalnej. Stąd większość aktywności rozszczepiania fluorogennego substratu była obecna w matrycy naczynia. Figura 5CSD zwiększona aktywność żelatynolityczna w macierzy naczyniowej. (A_D) Dystrybucja aktywności żelatynowej DQ (zymografia in situ) została porównana na pojedynczych odcinkach, z lokalizacją komórek zidentyfikowanych przez wybarwienie specyficznymi markerami komórkowymi: astrocytami, GFAP; neurony, NeuN; komórki śródbłonka, RECA; komórki mięśni gładkich, SMA. Markery komórkowe wizualizowano przez przeciwciało drugorzędowe skoniugowane z Cy-3 i zabarwiono na kolor czerwony. Pola z scalonymi obrazami konfokalnymi (kolumna scalona) są wyświetlane przy większym powiększeniu w skrajnie prawej kolumnie (wstawka). Działanie rozszczepiające żelatynę było widoczne w ścianach naczyń krwionośnych i otaczających je neuronach. Aktywność rozszczepiania rzadko była spotykana w komórkach z komórkami GFAP-dodatnimi. Rysunek pokazuje jeden przykład. Nieczęste działanie wykryto w komórkach śródbłonka i komórkach mięśni gładkich, ale głównie w macierzy naczyniowej. Skrawki otrzymano 12 godzin po CSD. Strzałki wskazują obszary pokazujące kolokalizację. Pręty skali: 20 m. MMP, w szczególności MMP-9, rozszczepiają białka błony podstawnej i zakłócają BBB. Przy użyciu metody Western blot (n = 6) i immunohistochemii (n = 4) stwierdziliśmy, że CSD powodowało rozerwanie BBB i spadek lamininy białkowej substratu MMP (Figura 6, A i C)
[patrz też: enterococcus faecalis w moczu, trufla kraków, węglowodany złożone tabela ]
[podobne: królestwo pierożka, pompon komis, pijalnia wódki i piwa kraków ]