Rozszerzająca się depresja korowa aktywuje i podwyższa MMP-9 ad 6

Po urazowym uszkodzeniu mózgu, EBA zmniejsza się w strefie korowej stłuczenia (47) i niedokrwiennego mózgu (48). Jednak nie możemy stwierdzić na podstawie istniejących danych, czy EBA, laminina lub ZO-1 jest bezpośrednio rozszczepiane przez MMP w tym modelu. Jednak utrata ZO-1, krytycznego wewnątrzkomórkowego białka o wąskim złączu (20) i utraty immunoreaktywności lamininy (49) są zgodne z dysfunkcją BBB. Kakinuma i in. odkryli, że wytwarzanie lamininy jest zmniejszone w astrocytach, gdy zwiększa się przepuszczalność BBB w odpowiedzi na obrażenia spowodowane przeziębieniem (49). Zgodnie z tymi danymi zaobserwowaliśmy zwiększoną zawartość albuminy i wody mózgowej jednocześnie z utratą ZO-1 i lamininy. Niebieski wyciek Evansa (i, jak przypuszczamy, zwiększona zawartość wody w mózgu) był zależny od MMP, co wskazuje na wpływ CSD i MMP-9 na funkcję BBB. Nie określono względnego udziału wywołanej CSD naczyniowej i neuronalnej aktywności MMP w zmianach w przepuszczalności naczyń mózgowych. Aby udowodnić, że dysfunkcja BBB rozwija się jako specyficzna konsekwencja aktywacji MMP-9, najpierw przetestowaliśmy inhibitor MMP i wykazaliśmy, że wyciek albuminy i aktywności MMP został zablokowany. Po drugie, zastosowaliśmy chelator cynkowy, który blokował większość aktywności rozszczepiającej żelatynę in situ, co wskazuje, że proteazy, które wymagają cynku do swojej funkcji (np. MMP-9) spowodowały rozszczepienie żelatyny. Jako trzecie podejście wykorzystaliśmy genetycznie zmodyfikowane myszy z delecją w genie MMP-9, aby pokazać, że MMP-9 jest proteazą niezbędną do wycieku. Myszy z nokautem MMP-9 wykazywały zmniejszony wyciek. Wyniki te są zgodne z opublikowanymi danymi pokazującymi, że myszy pozbawione MMP-9E mają mniej przerwania BBB i przecieków po eksperymentalnym niedokrwieniu i urazie, co sugeruje, że mechanizmy rozrywania BBB pomiędzy niedokrwieniem, urazem i nakładaniem CSD (19, 20). Nie możemy wykluczyć możliwego wkładu tkankowego aktywatora plazminogenu (tPA) w aktywację MMP we wczesnych punktach czasowych. Wiadomo, że tPA uwalniane jest po depolaryzacji za pośrednictwem mechanizmów zależnych od wapnia w neuronach in vitro (50), a tPA może zwiększać ekspresję MMP-9 (30), podobnie jak inne podtypy MMP. Zgodnie z tym pomysłem, wykryliśmy wzrost poziomu genu MMP-8 w 24 godziny po CSD (nasze niepublikowane dane). Istnieje wiele dowodów na to, że powtarzające się depresje przyczyniają się do rozwoju zawałów w tkance około-zawałowej u szczurów i kotów (51-54). Zakłócenie BBB może niekiedy towarzyszyć udarowi, urazowi i migrenie, a jedno ostatnie doniesienie wskazuje, że migrenie z aurą mają wysokie występowanie zawałów móżdżku, jeśli doświadczają jednego lub więcej ataków na miesiąc (55). Nasze dane sugerują, że CSD okołozawałowe może otworzyć BBB i promować przedłużony wyciek białek w surowicy przez mechanizmy zależne od MMP. Przerwanie bariery może przyczynić się do śmierci komórki i zwiększenia objętości zawału w upośledzonym mózgu. Dlatego też, CSD może zwiększać regulację MMP i zmiany przepuszczalności naczyń w migrenie, udarze i traumie i może prawdopodobnie przyczyniać się do podatności na krwotok mózgowy (54, 56, 57). Metody CSD. Model CSD zastosowano w sposób opisany wcześniej (24, 58), a wszystkie eksperymenty przeprowadzono zgodnie z protokołem zatwierdzonym przez instytucję zgodnie z Podręcznikiem National Institutes of Health dotyczącym opieki i użytkowania zwierząt laboratoryjnych w wytycznych instytucjonalnych. W skrócie, samce szczurów Sprague Dawley (250. 300 g masy ciała) lub samce myszy (myszy pozbawione MMP-9. Null i myszy CD1 o dopasowanym wieku, 25 g masy ciała) znieczulono przez dootrzewnowe wstrzyknięcie pentobarbitalu sodu (60 mg / kg) i zostały umieszczone w ramce stereotaktycznej. Opona twarda została starannie otwarta obustronnie. Elektrody rejestrujące umieszczano symetrycznie na obu półkulach (przedni: 1. 3 mm przedni i 2. 4 mm po bokach w stosunku do bregmy w przypadku szczurów, 1. 2 mm przedni i 1. 3 mm po bokach w stosunku do bregmy myszy), o ile nie zaznaczono inaczej. W każdym eksperymencie grupę pozorowaną przygotowywano przez obustronną kraniotomię i otwieranie opony twardej u znieczulonych zwierząt. Nie włożono elektrod. W grupach eksperymentalnych, korowe potencjały stacjonarne i elektrokortykogramy rejestrowano za pomocą jedno-lufowych szklanych mikroelektrod wstawionych 900 .m do kory szczura i 400 .m do kory myszy lub umieszczano na powierzchni, aby zapobiec CSD podczas wstawiania elektrody. CSD został zainicjowany przez pinprick z igłą 30 Gauge. Temperaturę odbytniczą monitorowano w sposób ciągły i temperaturę ciała utrzymywano na poziomie 37. 0,5 ° C, aż zwierzęta obudzą się ze znieczulenia. Paradygmat trzech CSD był rutynowo stosowany, o ile nie zaznaczono inaczej. CSD i ich właściwości elektrofizjologiczne były dokładnie monitorowane. Zymografia żelu żelatynowego
[podobne: pompon komis, operacje plastyczne piersi, cukiernia michalscy ]
[przypisy: vanilla komis, cukiernia michalscy, centrum tanich podręczników ]