Rozszerzająca się depresja korowa aktywuje i podwyższa MMP-9 ad 5

Spadek wycieku 6 godzin po wykryciu CSD u myszy pozbawionych ekspresji genu MMP-9 w porównaniu z myszami o tym samym wieku, o podobnym tle (CD-1) (n = 5 na grupę; P <0,05 vs. typ szczepu), chociaż samo CSD nie różniło się między szczepami. Dane wyrażono jako stosunek wycieku niebieskiego Evansa w homogenatach z obu stron. Jako drugie podejście, uzasadniliśmy, że jeśli aktywacja MMP-9 była niezbędna do indukowanego CSD wycieku albumin, wówczas wynaczyniony barwnik witalny byłby stłumiony lub nieobecny u myszy zerowych MMP-9. Tracer wyciek był znacznie zmniejszony po 6 godzinach u myszy z nokautem MMP-9 w porównaniu z dopasowanymi wiekiem myszami kontrolnymi podobnego szczepu tła (CD-1) (Figura 8, stosunek CSD / bez CSD, 1,1. 0,1 względem 2,6. 0,3 dla MMP -9 null myszy i szczep typu dzikiego, odpowiednio, n = 5, P <0,05). Właściwości elektrofizjologiczne CSD nie różniły się między myszami typu dzikiego i zmutowanymi. Dane te sugerują MMP-9 w zakłóceniu BBB, które następuje po CSD. Dyskusja Zgłaszamy nowe odkrycie, że CSD aktywuje i podwyższa poziom MMP i promuje trwałe zmiany w przepuszczalności naczyń. Aktywację MMP-9 wykryto już 15-30 minut metodą zymografii in situ, a następnie zymografią żelatynową. Po 3 godzinach aktywność MMP pojawiła się w neuronach i błonach pajęczynówki pia. W tym momencie wykryliśmy również wyciek błękitu Evansa i obrzęk w tkankach korowych. Aktywacja MMP-9 była długotrwała, obserwowana 48 godzin po indukcji. Aktywność MMP zaobserwowano po raz pierwszy w obrębie penetrujących tętniczek korowych, ale nie kolokalizowano w śródbłonku lub komórkach mięśni gładkich; pojawił się wyraźnie w matrycy naczynia. Szybki początek aktywności podobnej do MMP sugerował nam, że naczynia krwionośne konstytutywnie wyrażają MMP, być może syntetyzowane wewnątrz i uwalniane w wyniku CSD z śródbłonka (29, 30) lub mięśni gładkich. W rzeczywistości konstytutywna MMP-9 była podobno wyrażana w hipokampowych naczyniach krwionośnych (31, 32). Dobrze wiadomo, że komórki mięśni gładkich naczyń syntetyzują i uwalniają MMP-9, szczególnie gdy są eksponowane na takie bodźce, jak uszkodzenie mechaniczne, PMA, płodowa surowica cielęca, trombina i interleukina-1 (3, oraz współistnieją z zaawansowanym wiekiem (33. 36). . W 3 godziny po CSD większość aktywności żelatynowej in situ zlokalizowano w neuronach. Zgodnie z naszymi wynikami, inni wykazali, że MMP-9 i MMP-2 były wizualizowane w warstwie ziarnistej komórki i glejaku Bergmana w dorosłym móżdżku (37). Aktywność MMP jest ważna dla reorganizacji synaptycznej i pozakomórkowej lub neurotoksyczności (w niedokrwieniu i urazie) i wzrasta w neuronach hipokampowych od wysokiego poziomu podstawowego po napadzie indukowanym kainitem (26). Vecil i in. pokazał, że neurony. wyrażone. MMP-9 i MMP-2 żelatynowa aktywność rozszczepiająca in vitro w warunkach podstawowych i bodźce zapalne, takie jak cytokiny, takie jak interleukina-1. zwiększ ich ekspresję (38). Konsekwencje neuronalnej ekspresji MMP nie są znane. Uwolnienie do przestrzeni pozakomórkowej po CSD może przyczynić się do zmian naczyniowych obserwowanych po CSD. Rodniki tlenowe, tlenek azotu (NO) i proteazy są zaangażowane w aktywację MMP. Podczas CSD, prozapalne cytokiny (6) i NO zwiększają się w tkance mózgowej (39, 40). Synteza NO jest szybka i utrzymuje się przez co najmniej godzinę (39). NO podobno S-nitrozyluje krytyczną resztę cysteinową w kieszeni katalitycznej przez zastąpienie cynku (41). Inne cząsteczki tlenu, takie jak ponadtlenek, również zostały wplątane (42, 43). Proteazy, takie jak stromelizyna-1 i plazmina, zostały powiązane z aktywacją MMP-9. Metoda aktywacji nieaktywnej formy MMP-9 będzie musiała zostać poddana dalszej analizie. CSD stymuluje c-fos, czynnik martwicy nowotworu- ., interleukinę-1. produkcja (7) i translokacja jądrowa podjednostki NF-kB p65 (nasze niepublikowane dane). Wszystkie cztery wiążą region promotorowy MMP-9 (9, 10). Zgodnie z tymi obserwacjami, stwierdziliśmy zwiększenie poziomu mRNA MMP-9 między a 6 godzin po CSD. Ponadto, po regulacji indukcji mRNA MMP-9 po CSD wywołanym chlorkiem potasu potwierdzono krytyczne powiązanie między depolaryzacją a regulacją w górę MMP (44). MMP rozszczepiają szeroką gamę substratów, w tym składniki podstawowej lamininy, takiej jak laminina, kolagen typu IV i składniki ECM mózgu, takie jak elastyna, fibronektyna, tenascyna i kolageny. Po niedokrwieniu lub urazie zmniejsza się laminina, kolagen typu IV i białko zaciśnięte w zwojach ZO-1 (45). Zaobserwowaliśmy spadek immunoreaktywności lamininy 12 godzin po CSD, a także zmniejszenie EBA i ZO-1. Kierowanie in vivo na EBA (z anty-EBA) prowadzi do otwarcia BBB widocznie przez drogi międzykomórkowe i transkomórkowe, chociaż dokładna rola i tożsamość EBA nie jest znana (46) [podobne: grudziądz jednostka wojskowa, legato motocykle, sos brokułowy do makaronu ] [patrz też: spaghetteria kobierzyńska, decoria galerie, studio urody 11 ]