Rola heterologicznych połączeń między czerniakiem a komórkami śródbłonka w przerzutach

Podlinice F10 i BL6 komórek czerniaka myszy B16 są przerzutowe po wstrzyknięciu dożylnym, ale tylko komórki BL6 są przerzutowe po wstrzyknięciu podskórnym. Stwierdziliśmy, że koneksyna (Cx) 26 jest podwyższona w komórkach BL6. Aby zbadać tworzenie się szczelinowych połączeń, opracowaliśmy układ współhodowli, w którym otwarty segment żyły został umieszczony na dnie naczynia hodowlanego, a następnie na nim zaszczepiono wyznakowane barwnikiem komórki czerniaka. Immunohistochemia wykazała, że segment żyły zachował integralność monowarstwy śródbłonka. W tym systemie komórki BL6 mogły przenosić barwnik do komórek śródbłonka, ale komórki F10 nie mogły. Transfekcja dzikiego typu Cx26 wykazała, że komórki F10 są kompetentne do sprzęgania z komórkami śródbłonka i spontanicznie ulegają przerzutom jak komórki BL6. Odwrotnie, transfekcja z dominującą negatywną postacią Cx26 spowodowała, że komórki BL6 wykazywały niedobór sprzężenia i mniej przerzutów. W przypadku zmian w czerniaku ludzkim poziom ekspresji Cx26 był niski w komórkach czerniaka znajdujących się w warstwie podstawowej, ale znacznie zwiększony w komórkach czerniaka atakujących skórę właściwą. Wyniki sugerują, że Cx26 odgrywa rolę w wewnątrznaczyniowym i wynaczynieniu komórek nowotworowych poprzez tworzenie heterologicznych połączeń szczelinowych z komórkami śródbłonka. Wprowadzenie Wśród komórek czerniaka mysiego B16, komórki F10 i BL6 są prawie identyczne, z wyjątkiem ich przerzutów (1). Oba typy komórek kolonizują płuca po wstrzyknięciu do żyły ogonowej (eksperymentalny test przerzutowy). W przeciwieństwie do tego, po wstrzyknięciu podskórnym w poduszkę (test spontanicznego przerzutowania), komórki BL6 są znacznie bardziej przerzutowe niż komórki F10 (1). Ponieważ test spontanicznego przerzutu odzwierciedla sekwencję in vivo zdarzeń przerzutowych, wydaje się, że komórki BL6 mogą posiadać pełny zestaw czynników istotnych dla przerzutów, których wszystkie lub niektóre mogą być nieobecne w komórkach F10. Alternatywnie, komórki F10, ale nie BL6, mogą wyrażać czynnik, który hamuje przerzuty. Geny kodujące takie czynniki prawdopodobnie ulegają różnej ekspresji między dwiema liniami komórkowymi. Wcześniej opisaliśmy ulepszony sposób konstruowania odejmowanych bibliotek cDNA (2. 4). Zastosowanie tej metody do komórek F10 i BL6 dało zestaw genów, które były transkrypcyjnie regulowane w komórkach BL6 (5, 6). Tutaj donoszemy, że koneksyna 26 (Cx26) jest jednym z tych genów i może regulować przerzutowy fenotyp komórek czerniaka. Connexiny to rodzina co najmniej 12 białek, które tworzą międzykomórkowe kanały połączeń szczelinowych (7). Półksiężycowe węzły luki, zwane koneksonami, składają się z homomerycznych lub heteromerycznych heksamerów koneksyn i zapewniają kanały do bezpośredniego przejścia jonów i innych cząsteczek o niskiej masie cząsteczkowej, w tym drugich przekaźników, między komórkami (8). Ten rodzaj komunikacji międzykomórkowej jest istotą pośredniczonej kontroli wzrostu komórek za pośrednictwem bezpośredniego kontaktu i jest ważny dla wielu procesów fizjologicznych i rozwojowych (9. 11). Kilka doniesień wykazało, że w trakcie kancerogenezy zakłócona jest komunikacja międzykomórkowa (GJIC) (12-16). Z drugiej strony rola koneksin w nabywaniu bardziej złośliwych fenotypów pozostaje kontrowersyjna (17. 20). Ekspresję Cx26 badano intensywnie w hepatocytach i komórkach nabłonka płaskonabłonkowego w warunkach fizjologicznych i patologicznych (15, 21-24). Uważa się, że poziom ekspresji Cx26 spada, ponieważ hepatocyty i keratynocyty nabywają potencjał autonomicznej proliferacji (21, 23). Donieśliśmy, że transfekcja Cx26, ale nie Cx40 i Cx43, dała hamujący wpływ na wzrost komórek in vitro i in vivo komórek raka płaskonabłonkowego HeLa (15). Z drugiej strony, rola Cx26 podczas kancerogenezy melanocytów i złośliwego postępu komórek czerniaka jest słabo poznana. W niniejszym badaniu odkryliśmy, że komórki BL6 wyrażały Cx26 tak obficie jak tkanki wątroby. Następnie stwierdzono, że komórki BL6, ale nie komórki F10, stanowią kompetentną dla GJIC populację komórek. Co ciekawe, komórki BL6 mogłyby z łatwością tworzyć heterologiczne połączenie szczelinowe z komórkami śródbłonka, ale nie mogłyby ze sobą skutecznie tworzyć. Spontaniczny test przerzutów wskazywał, że tworzenie takich heterologicznych połączeń luki przez Cx26 może być odpowiedzialne za skuteczne przerzuty komórek F10 i BL6. Metody Linie komórkowe i kultura. Komórki czerniaka B16, F10 i BL6 zostały dostarczone przez IJ Fidlera (The University of Texas, Houston, Texas, USA). Mysie komórki śródbłonka myszy NIH3T3 i SVEC4-10 zakupiono z American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, Virginia, USA). Wszystkie komórki utrzymywano w DMEM uzupełnionym 10% płodową surowicą cielęcą (pożywka wzrostowa)
[więcej w: deli 8, nadczynność tarczycy leki, motochemia ]
[przypisy: centrum tanich podręczników, deli 8, well done kraków ]