Rola heterologicznych połączeń między czerniakiem a komórkami śródbłonka w przerzutach ad 7

Komórki Nevusa i komórki czerniaka in situ były ujemne we wszystkich badanych przypadkach. W próbce nevus obserwowaliśmy naskórek poza zmianą znamionową i stwierdziliśmy, że melanocyty były również Cx26 ujemne w warunkach fizjologicznych (dane nie pokazane). W przypadkach zaawansowanego czerniaka immunoreaktywność zmieniała się w miejscach zawierających komórki czerniaka. Komórki czerniaka przebywające w naskórkowej warstwie bazowej były Cx26 ujemne lub słabo dodatnie we wszystkich siedmiu zbadanych przypadkach (Figura 5, c i d). Przeciwnie, komórki czerniaka odłączone od warstwy podstawowej lub w procesie inwazji do skóry właściwej często wykazywały barwienie Cx26-dodatnie (Figura 5, c i d). Ten wzrost immunoreaktywności komórek czerniaka wykryto w sześciu z siedmiu przypadków. Figura 5 Badanie histologiczne tkanek ludzkiego czerniaka poprzez barwienie przeciwciałem przeciw Cx26 (strona lewa) i H & E (strona prawa). Pokazano cztery reprezentatywne przypadki. (a andb) Dwa przypadki z czerniakiem in situ (poziom Clarka = I). (c i d) Dwa przypadki z zaawansowanym czerniakiem (poziom Clarka = III). Keratynocyty służyły jako kontrola wewnętrzna w barwieniu immunohistochemicznym (21). Strzałki wskazują na komórki czerniaka lub zmiany chorobowe nadal występujące w obrębie naskórka, z których większość miała wynik ujemny Cx26. Należy zauważyć, że reaktywność dla przeciwciała Cx26 wzrosła w komórkach czerniaka atakujących do skóry właściwej, jak widać w lewej połowie cid. Bar: 75 m. Omówienie Chociaż ekspresja Cx w melanocytach lub komórkach czerniaka nie była intensywnie badana, odkryliśmy, że komórki BL6 wyrażały gen Cx26 tak obficie jak tkanki wątroby. Hepatocyty są jednym z typów komórek, które ekspresjonują Cx26 najobficiej i wykazują skuteczne sprzężenie ze sobą (32, 33). Ponieważ nie było mutacji w sekwencji kodującej mRNA Cx26 ulegającej ekspresji w komórkach BL6, oczekiwano, że komórki BL6 będą tak sprawne jak GJIC jak hepatocyty. Nieoczekiwanie mogliśmy wykryć niewielkie sprzężenie barwników między komórkami BL6 w hodowli. Ponadto wykryto niewielki lub żaden transfer barwnika z komórek BL6 do komórek śródbłonka hodowanych na płytkach. Zamiast tego wykryliśmy przeniesienie barwnika z komórek BL6 do komórek śródbłonka tworzących IVC. Oprócz komórek BL6, komórki F10 uzyskały podobną zdolność przenoszenia barwnika przez transfekcję Cx26. Transfekcja z dominującymi negatywnymi postaciami Cx26 znosiła zdolność do łączenia barwników komórek BL6. Wyniki te wskazują, że sprzężenie barwników między czerniakiem i komórkami śródbłonka było zdarzeniem specyficznym dla Cx26. Jednak charakter koneksyn na komórkach śródbłonka, które uczestniczą w tworzeniu połączeń luki z komórkami czerniaka wyrażającymi Cx26 pozostaje niejasny. Nie było żadnej, jeśli w ogóle, ekspresji Cx26 w segmentach IVC na poziomie mRNA lub białka (Figura 1a i Figura 3, aib). Wykazano, że heterotypowe połączenie szczelinowe pomiędzy Cx32 i Cx26 przenosiło barwnik tak skutecznie, jak Cx26-homotypowe skrzyżowanie szczelinowe (34). Jednakże nie jest prawdopodobne, że Cx32 na komórkach śródbłonka jest odpowiednikiem Cx26 na komórkach czerniaka, ponieważ klony F10 transfekowane Cx32 wykazywały niedobór sprzężenia barwników z komórkami śródbłonka. Wiadomo, że komórki śródbłonka wyrażają kilka podtypów Cx, w tym Cx37, Cx40 i Cx43 (35). Wykryliśmy ekspresję genu Cx43 w segmentach IVC (Figura 1a) i określiliśmy lokalizację białka Cx43 w komórkach śródbłonka IVC (Figura 2e). Jednak heterologiczne połączenie szczeliny Cx26-Cx43 jest niewystarczające do komunikacji między komórkami HeLa transfekowanymi Cx w hodowli (34). Skuteczne tworzenie GJIC wymaga integralności zarówno interakcji macierzy zewnątrzkomórkowej między komórkami, jak i komórki (36. 38). Ponieważ wydaje się, że komórki śródbłonka w segmencie IVC zachowują ten rodzaj integralności (ryc. 2), mogą komunikować się z komórkami czerniaka poprzez heterologiczne połączenie szczeliny Cx26-Cx43. Co najwyżej 5% komórek BL6 wysianych na cząstki IVC przenosiło barwnik do komórek śródbłonka w danym punkcie czasowym. Rodzi to możliwość, że tylko część populacji komórek BL6 była w stanie przenosić barwnik. Poniższe wyniki mogą rzucić nieco światła na tę kwestię: (a) po 6 godzinach większość komórek BL6 utraciło fluorescencję, podczas gdy większość komórek F10 pozostało tak fluorescencyjnych jak te po 4 godzinach; (b) poziom ekspresji genu Cx26 w komórkach BL6 nie zmienił się nawet po ich przerzutowaniu do płuc; i (c) żaden z klonów transfektantu BL6 nie wykazywał zmienionych poziomów ekspresji endogennego genu Cx26 (Figura 4b). Wyniki te nie wykluczają, lecz raczej faworyzują interpretację, że komórki BL6 są kompetentną populacją komórek sprzęgającą barwnik
[podobne: legato motocykle, królestwo pierożka, fishing24 ]
[więcej w: decoria galerie, studio urody 11, vanilla komis ]