Rola heterologicznych połączeń między czerniakiem a komórkami śródbłonka w przerzutach ad 5

Wyniki te wskazują, że segmenty IVC zachowały ciągły śródbłonek w ich najwyższych warstwach pomimo sporadycznego braku jąder. Przeciwciało przeciwko VE-kadherynie preferencyjnie wybarwia śródbłonkowe błony śluzowe; pewne wybarwienie okazało się zlokalizować w miejscu przyłączenia komórki śródbłonka (Figura 2c). Barwienie paxillin wykryto jako punkcik w komórkach śródbłonka i głównie pokryto barwieniem integryny integryny (Figura 2d). Northern blotting wykorzystujący segment IVC ujawnił, że poziomy mRNA dla koneksyn innych niż Cx43 były poniżej granicy wykrywalności (Figura 1a). Białko Cx43 znajdowało się szeroko w cytoplazmie śródbłonka, ale pewne zabarwienie skoncentrowano w miejscu przyłączenia komórki śródbłonka (Figura 2e). Immunoreaktywność komórek śródbłonka nie zmieniła się po 6 godzinach hodowli (dane nie pokazane). Nie wykryto swoistych immunostain w żadnym eksperymencie z kontrolą ujemną (dane nie pokazane). Wyniki te sugerują, że komórki śródbłonka zachowały swoją integralność w odniesieniu do interakcji między komórkami i komórkami i pozakomórkowymi matrycami w okresach hodowli. Figura 2 Reprezentatywne przekroje poprzeczne segmentu IVC po hodowli przez 4 godziny. Skrawki w lewych panelach poddano reakcji z przeciwciałami przeciw PECAM-1 (a), integrynie v (b), VE-kadherynie (c), paxillinie (d) i Cx43 (e), i wybarwiono FITC. Sąsiednie sekcje wybarwiono H & E (prawa strona). Komórki śródbłonka znajdują się w błonie wewnętrznej, a komórki mięśni gładkich znajdują się w ośrodku IVC. Pericyty mogą znajdować się na granicy między intimą a mediami. H & E barwi jądro tych komórek ciemnoniebiesko. Strzałki w punktach b i d wskazują zabarwienie na podstawowych błonach śródbłonkowych. Strzałki w punktach c i e wskazują na wybarwienie (lewa strona) w miejscu przyłączenia komórek śródbłonka do śródbłonka. Bar: 20 m. Gdy komórki F10 lub BL6 zostały zaszczepione na otwartych segmentach IVC, większość komórek czerniaka osiadła na powierzchni IVC w ciągu 2 godzin. Zgodnie z wynikiem Western blot (Figura 1b), komórki BL6, ale nie komórki F10, wyrażały Cx26 podczas okresu ko-kultury (Figura 3, aib). Niektóre immunobarwienie skoncentrowano na membranie komórkowej BL6 skierowanej w stronę żyły (Figura 3b). Następnie posialiśmy komórki czerniaka znakowane BCECF na segmencie IVC i obserwowaliśmy profil przenoszenia barwnika bezpośrednio nad kokulturą za pomocą mikroskopu wyposażonego do epifluorescencji. Po 2 godzinach hodowli wszystkie komórki F10 i BL6 wykazywały silną fluorescencję w cytoplazmie, co wykazało brak przeniesienia barwnika (Figura 3, c i d). Kiedy skanowaliśmy kokulturę po 4 godzinach, od czasu do czasu znaleźliśmy słabo fluorescencyjny obszar wokół komórek BL6, ale nie wokół komórek F10 (Figura 3e). Przy wyższym powiększeniu wyraźnie pokazano przeniesienie barwnika z komórek BL6 do komórek śródbłonka (Figura 3f). Barwnik był również przenoszony między sąsiednimi komórkami śródbłonka. Po 6 godzinach większość komórek BL6 straciła fluorescencję, podczas gdy większość komórek F10 pozostała tak samo fluorescencyjna, jak te po 4 godzinach (dane nie pokazane). Figura 3D-transferowa analiza z zastosowaniem współzultury złożonej z komórek czerniaka i segmentów IVC. (a i b) Ekspresja Cx26 w komórkach czerniaka po hodowli w IVC przez 4 godziny. Przekroje poprzeczne kokulturowanej tkanki zawierającej komórki F10 (A w panelu a) lub BL6 (B w panelu b) wybarwiono przeciwciałem anty-Cx26. Strzałki wskazują lokalizację białka Cx26 na błonie komórkowej. Należy również zauważyć, że komórki śródbłonka IVC zawierają znacznie mniej Cx26 niż Cx43. Bar: 20 m. (c. f) wyznakowane BCECF komórki F10 (c i e) lub BL6 (d i f) zaszczepiono na segmencie IVC i obserwowano bezpośrednio nad kulturą w punktach 2 (c i d) i 4 (e i f) przy użyciu mikroskopu wyposażonego w epifluorescencję. Względna intensywność fluorescencji jest wyświetlana przez 256-kolorowe widmo; czerwony oznacza większą intensywność niż niebieski. Groty strzałek wskazują komórki F10 i BL6 oznaczone BCECF. Bar: 20 m. (g) Liczbę komórek wykazujących sprzężenie barwników z komórkami śródbłonka zliczono w próbce 500 znakowanych BCECF komórek obserwowanych po 4 godzinach hodowli. Dane wyrażono jako średnią z trzech niezależnych doświadczeń. Bary = SE; SE było czasami zbyt małe, aby mogło być reprezentowane. AP <0,01 w teście w porównaniu z wartością uzyskaną z komórek F10. BP <0,01 t testem w porównaniu z wartością uzyskaną z komórek BL6. Aby bardziej systematycznie zbadać to zjawisko, przygotowaliśmy pięć potraw zawierających współhodowlę komórek F10 lub BL6 z segmentami IVC. Każdą współhodowaną tkankę utrwalano aldehydem glutarowym co 15 minut od 3 godzin 30 minut do 4 godzin 30 minut [podobne: fishing24, pompon komis, legato motocykle ] [przypisy: pompon komis, pijalnia wódki i piwa kraków, trufla kraków ]