Polimorfizm miejsca wiązania Sp1 COL1A1 predysponuje do złamania osteoporotycznego przez wpływ na gęstość i jakość kości ad 6

Analiza genomowego DNA od tych samych pacjentów wykazała, że produkt P-P był również nieco bardziej obfity niż produkt P-P pochodzący prawdopodobnie ze względu na specyficzne dla allelu różnice w wydajności amplifikacji PCR (reprezentatywny elektroforogram Figura 3b, góra). Nawet po skorygowaniu niewielkich różnic specyficznych dla allelu obserwowanych w genomowym DNA, pozostała wysoce znacząca różnica w obfitości produktu między A. i. S. allele w cDNA (P <0,000001) (Figura 3c). Nie stwierdzono znaczącej różnicy w liczebności produktu specyficznego dla allelu w próbkach pobranych od mężczyzn lub kobiet lub w próbkach pochodzących z biopsji transiliozy w porównaniu z próbkami pochodzącymi z hodowli osteoblastów (dane nie pokazane). Dane te wskazują, że zwiększone powinowactwo wiązania. S. allelowi dla białka Sp1 towarzyszy względny wzrost obfitości transkryptów swoistych dla allelu A w heterozygotach. Wpływ polimorfizmu Sp1 na mRNA kolagenu i produkcję białka. Wpływ polimorfizmu na produkcję białka kolagenu badano przy użyciu hodowanych pierwotnych ludzkich osteoblastów od pacjentów o różnym genotypie (Figura 4). Ilościowe analizy kolagenu typu I wytwarzanego przez osteoblasty pochodzące od. SS. homozygoty wykazały wartości zbliżone do oczekiwanego stosunku 2: łańcuchów białka kolagenu a1 (I) do a2 (I) (1,99 – 0,07 do 1). Osteoblasty pochodzące od Psa. heterozygoty wytwarzały zwiększony stosunek łańcuchów y1 (I) do a2 (I) (2,36-0,10 do 1), a to było znacząco różne od stosunku w. SS. homozygot (p = 0,007). Dane te wskazują, że kolagen typu I wytwarzany jest przez osteoblasty pochodzące od P-S. heterozygoty zawierają zwiększoną ilość łańcucha (1) kolagenu w stosunku do łańcucha a2 (I). Biorąc pod uwagę, że hodowle osteoblastów pochodziły od pacjentów w różnym wieku, płci i podstawowej diagnozie, przeprowadziliśmy GLM ANOVA w celu ustalenia, czy którykolwiek z tych czynników zakłócających mógł mieć wpływ na wyniki. Wykazało to, że spośród wszystkich tych czynników jedynie genotyp był istotnym predyktorem stosunku od (I) do> 2 (I) (P = 0,016). Zwiększony stosunek a1 (I) do a2 (I) stwarza możliwość, że część kolagenu mogła być obecna w postaci homotrimerów złożonych z trzech łańcuchów kolagenu a (I) ([. (I) 3 ]) (28), ponieważ sposób przygotowania białka oznacza, że tylko trimeryczne cząsteczki kolagenu są ładowane na żel. Próbowaliśmy wykrywać nienaruszone [. (I) 3] w tych próbkach za pomocą różnych technik, w tym różnicowego wytrącania soli (29), chromatografii jonowymiennej (28) i stabilności termicznej (30); jednak wyniki były niejednoznaczne, prawdopodobnie z powodu ograniczonej ilości materiału dostępnego do analizy, a jedynie niewielka część kolagenu, obliczona na około 13%, prawdopodobnie występowała w postaci [. (I). 3]. W celu ustalenia, czy zmieniony stosunek łańcuchów białkowych kolagenu a1 (I) do a2 (I) w psi. heterozygotom towarzyszyły różnice w liczebności mRNA, przeprowadziliśmy testy ochrony przed RNazą w sześciu próbkach, w których zarówno RNA, jak i białko były dostępne do analizy. Wyniki tych eksperymentów zestawiono w Tabeli 2, która pokazuje, że wzrost względnej obfitości łańcuchów białkowych kolagenu (1 (I) do a2 (I) odnotowano w psi. heterozygotom towarzyszył wzrost względnej obfitości mRNA COL1A1 do COL1A2. Figura 4 Wpływ polimorfizmu COL1A1 na produkcję białka kolagenowego typu I przez pierwotne ludzkie osteoblasty. (a) Reprezentatywne próbki pochodzące od dwóch pacjentów wykazujące oczekiwany stosunek 2: łańcuchów a (I) / a (I) 2 w. SS. homozygota i zwiększona względna obfitość (2,3: 1) łańcuchów kolagenu a (I) / a 2 (I) w psi. heterozygota. (b) Łączne dane (średnia. SEM) z 14. SS. homozygoty i 17s. heterozygot. Tabela 2 Poziom białek i mRNA kolagenu w osteoblastach hodowanych od pacjentów o różnym genotypie Wpływ polimorfizmu na biomechaniczne i materiałowe właściwości kości. Badaliśmy biomechaniczne i materiałowe właściwości kości od pacjentów o różnym genotypie, wykorzystując beleczkowe rdzenie kości pochodzące z czterech miejsc w głowie kości udowej (ryc. 5a). Analiza danych wykorzystujących GLM ANOVA wprowadzającą diagnozę, genotyp, płeć, gęstość rdzenia kostnego i miejsce pobrania próbki do modelu wykazała znaczącą zmienność umiejscowienia na granicy plastyczności (P <0,001); znacznie zmniejszona granica plastyczności pS. rdzenie kości w porównaniu z. SS. rdzenie (średnia . SD) = 3,74. 0,30 vs. 4,53. 0,27, P = 0,031 (Figura 5b); i znaczący wpływ gęstości pozornej na granicę plastyczności (P <0,0001, dane nie przedstawione). Nie było istotnej różnicy między pozorną gęstością rdzeni kostnych według genotypu ((SS-S = 0,55 - 0,02 vs [podobne: motochemia, maseczka na włosy z siemienia lnianego, nadczynność tarczycy leki ] [podobne: centrum tanich podręczników, deli 8, well done kraków ]