Rola heterologicznych połączeń między czerniakiem a komórkami śródbłonka w przerzutach

Podlinice F10 i BL6 komórek czerniaka myszy B16 są przerzutowe po wstrzyknięciu dożylnym, ale tylko komórki BL6 są przerzutowe po wstrzyknięciu podskórnym. Stwierdziliśmy, że koneksyna (Cx) 26 jest podwyższona w komórkach BL6. Aby zbadać tworzenie się szczelinowych połączeń, opracowaliśmy układ współhodowli, w którym otwarty segment żyły został umieszczony na dnie naczynia hodowlanego, a następnie na nim zaszczepiono wyznakowane barwnikiem komórki czerniaka. Immunohistochemia wykazała, że segment żyły zachował integralność monowarstwy śródbłonka. W tym systemie komórki BL6 mogły przenosić barwnik do komórek śródbłonka, ale komórki F10 nie mogły. Continue reading „Rola heterologicznych połączeń między czerniakiem a komórkami śródbłonka w przerzutach”

Względna objętość komory kwasowej jako biomarker związany z lizosomalnym spichrzaniem ad 8

Modele regresji liniowej (w tym modele z splajnami) zostały wyposażone w metody największej wiarygodności; Nieliniowe modele regresji dopasowano stosując metody najmniejszych kwadratów. Modele regresji z ograniczoną liczbą skończonych klas zostały dopasowane za pomocą modułu flexmix z zestawu R (25) w celu zdefiniowania składników całkowitego wyniku klinicznego w funkcji wieku; liczba składników została wybrana poprzez zminimalizowanie Bayesian Information Criterion. Kawałek regresji liniowej modele zostały wyposażone przy użyciu pakietu R SiZer (26). Skorygowane wartości P dla porównań parami uzyskano za pomocą poprawki Benjaminiego-Hochberga (27). Wszystkie obliczenia przeprowadzono w języku R i środowisku obliczeń statycznych (wersja 2.14.2, http://www.R-project.org). Continue reading „Względna objętość komory kwasowej jako biomarker związany z lizosomalnym spichrzaniem ad 8”

Względna objętość komory kwasowej jako biomarker związany z lizosomalnym spichrzaniem ad 7

Ci 2 pacjenci otrzymywali również, przez wstrzyknięcie do lędźwiowego dokarmiania, 175 mg HP (CD co 2 tygodnie, począwszy od października 2010 r. Pacjent 3 i 4 rozpoczęto od podania iv HP CD w grudniu 2010 r. I kwietniu 2011 r., Odpowiednio. Zwiększono ich dawkę do 2000 mg / kg, podawanych co tydzień. Pacjenci w wieku 5 i 6 lat rozpoczęli od podania dożylnego HP-CD w styczniu 2010 r. Continue reading „Względna objętość komory kwasowej jako biomarker związany z lizosomalnym spichrzaniem ad 7”

Względna objętość komory kwasowej jako biomarker związany z lizosomalnym spichrzaniem ad 6

Obecnie na świecie jest 10 pacjentów z NPC1 poddanych dożylnej terapii HP-CD, z których 7 było włączonych do tego badania. Pacjenci uprzednio leczeni miglustatem (pacjenci 1, 4 i 7, pozycja 5) mieli zmniejszone wartości MEFL, w pobliżu lub w zakresie prawidłowym, przed rozpoczęciem leczenia HPPCD. Paradoksalnie, po terapii HPPCD wystąpił wyraźny wzrost fluorescencji Lysotracker limfocytów B. Pacjenci od do 6, z ekspozycją na lek dożylnie, opracowali podwyższone wartości MEFL, które były podobne do siebie; wszystkie oprócz były powyżej górnej granicy ogólnej populacji pacjentów NPC1. Pacjent 7 nigdy nie otrzymał HP. Continue reading „Względna objętość komory kwasowej jako biomarker związany z lizosomalnym spichrzaniem ad 6”

Rola heterologicznych połączeń między czerniakiem a komórkami śródbłonka w przerzutach ad 7

Komórki Nevusa i komórki czerniaka in situ były ujemne we wszystkich badanych przypadkach. W próbce nevus obserwowaliśmy naskórek poza zmianą znamionową i stwierdziliśmy, że melanocyty były również Cx26 ujemne w warunkach fizjologicznych (dane nie pokazane). W przypadkach zaawansowanego czerniaka immunoreaktywność zmieniała się w miejscach zawierających komórki czerniaka. Komórki czerniaka przebywające w naskórkowej warstwie bazowej były Cx26 ujemne lub słabo dodatnie we wszystkich siedmiu zbadanych przypadkach (Figura 5, c i d). Przeciwnie, komórki czerniaka odłączone od warstwy podstawowej lub w procesie inwazji do skóry właściwej często wykazywały barwienie Cx26-dodatnie (Figura 5, c i d). Continue reading „Rola heterologicznych połączeń między czerniakiem a komórkami śródbłonka w przerzutach ad 7”

Rola heterologicznych połączeń między czerniakiem a komórkami śródbłonka w przerzutach ad 6

W każdym z nich analizowaliśmy 500 komórek BCFF znakowanych BCECF zaszczepionych na segmencie IVC. Przy 4 godzinach kokultury średnio 22 komórki BL6 wykazywały sprzężenie barwników z komórkami śródbłonka (Figura 3g). Gdy obserwowaliśmy wspólnie hodowane tkanki w innych odstępach czasowych, liczba komórek BL6 wykazujących sprzęganie barwnika z komórkami śródbłonka była podobna do tej po 4 godzinach (danych nie pokazano). W przeciwieństwie do tego, małe lub zerowe sprzężenie barwników obserwowano w dowolnych współ-hodowlach zawierających F10. Różne klony F10 i BL6 otrzymano przez transfekcję dzikim i zmutowanymi formami Cx26 i Cx32 (Figura 4b, blot). Continue reading „Rola heterologicznych połączeń między czerniakiem a komórkami śródbłonka w przerzutach ad 6”

Rola heterologicznych połączeń między czerniakiem a komórkami śródbłonka w przerzutach ad 5

Wyniki te wskazują, że segmenty IVC zachowały ciągły śródbłonek w ich najwyższych warstwach pomimo sporadycznego braku jąder. Przeciwciało przeciwko VE-kadherynie preferencyjnie wybarwia śródbłonkowe błony śluzowe; pewne wybarwienie okazało się zlokalizować w miejscu przyłączenia komórki śródbłonka (Figura 2c). Barwienie paxillin wykryto jako punkcik w komórkach śródbłonka i głównie pokryto barwieniem integryny integryny (Figura 2d). Northern blotting wykorzystujący segment IVC ujawnił, że poziomy mRNA dla koneksyn innych niż Cx43 były poniżej granicy wykrywalności (Figura 1a). Białko Cx43 znajdowało się szeroko w cytoplazmie śródbłonka, ale pewne zabarwienie skoncentrowano w miejscu przyłączenia komórki śródbłonka (Figura 2e). Continue reading „Rola heterologicznych połączeń między czerniakiem a komórkami śródbłonka w przerzutach ad 5”

Rola heterologicznych połączeń między czerniakiem a komórkami śródbłonka w przerzutach czesc 4

W przypadku negatywnych kontroli, dobrane izotypowo immunoglobuliny, mysie IgG1 (MOPC-21, Sigma Chemical Co., St Louis, Missouri, USA); chomicze IgG, grupa 3 (A19-4, PharMingen) i szczurze IgG2a (R35-95, PharMingen), zastosowano w stężeniu jako swoiste przeciwciała. Skrawki przemywano PBS i barwiono wtórnymi przeciwciałami sprzężonymi z FITC w rozcieńczeniu 1: 1000 stosując anty-mysie IgG (MBL, Nagoya, Japonia) dla Cx26, Cx43, VE-kadheryny i paxillin; IgG przeciw chomiczce (koktajl; Pharmingen) dla integryny av; i anty-szczurze IgG (MBL) dla PECAM-1. Skrawki obserwowano za pomocą mikroskopu Axioplan2 (Carl Zeiss) wyposażonego w epifluorescencję. Sąsiadujące skrawki wybarwiono hematoksyliną i eozyną (H & E). Test spontanicznego przerzutu. Continue reading „Rola heterologicznych połączeń między czerniakiem a komórkami śródbłonka w przerzutach czesc 4”

Rola heterologicznych połączeń między czerniakiem a komórkami śródbłonka w przerzutach cd

Sondę Cx26 przygotowano z fragmentu cDNA AscI-ApaI obejmującego otwartą ramkę odczytu. Sondy Cx32 (nukleotydy [nt] 50-582) (26), Cx37 (nt 73-940) (27), Cx40 (nt 154-826) (28) i Cx43 (nt 458-1075) (wejście do GenBank numer X61576) uzyskano stosując PCR. Sondę (3-aktyny przygotowano w taki sam sposób (3). Bloty przemywano do ostatecznej ostrości 0,1 x SSC i 0,1% SDS w 50 ° C przed ekspozycją. Względną intensywność sygnału obliczono za pomocą systemu BAS 2000 (Fuji Photo Film Co., Tokio, Japonia). Continue reading „Rola heterologicznych połączeń między czerniakiem a komórkami śródbłonka w przerzutach cd”

Geny związane z uczuleniem macicy a 1 (USAG-1), nowy antagonista BMP eksprymowany w nerce, przyspiesza uszkodzenie rurki czesc 4

Najpierw oceniliśmy swoistość neutralizującej aktywności przeciwciała, stosując test pomiaru aktywności fosfatazy alkalicznej i fosforylacji Smad1 / 5/8 w komórkach C2C12 indukowanych przez BMP. Dodanie przeciwciała hamowało aktywność fosfatazy alkalicznej i fosforylację Smad1 / 5/8 indukowaną przez BMP-7, ale nie przez BMP-4 (Figura 5A) ani BMP-2 (dane nie przedstawione), wskazując na specyficzność przeciwciała. Jako kontrolę ujemną użyliśmy dopasowanego izotypowo IgG2B. Następnie podawano neutralizujące przeciwciało przeciwko BMP-7 do USAG1. /. Continue reading „Geny związane z uczuleniem macicy a 1 (USAG-1), nowy antagonista BMP eksprymowany w nerce, przyspiesza uszkodzenie rurki czesc 4”