Neutrofilowa kinaza białkowa C jako mediator urazu po reperfuzji czesc 4

Obfitość innych izoenzymów PKC wyrażanych w neutrofilach również nie uległa zmianie u myszy n PKCa w porównaniu z myszami WT (Figura 5, E i F). Te odkrycia wskazują na ważną rolę dla PKC. w kilku aspektach funkcji neutrofili. Figura 5Zmniejszona funkcja neutrofilów w myszach PKNa-null. (A) Adhezja neutrofilów stymulowana przez PMA (100 nM), peptyd fMLP (1. M) lub IL-8 (200 ng / ml). * P <0,05 w porównaniu z krowami z miotu WT (dwustronne, niesparowane testy t). (B) stymulowana IL-8P migracja neutrofili różniła się genotypem [F (l, 6) = 54,8; P = 0,0003] i leczenie [F (2, 6) = 63,08; P <0,0001] bez istotnej interakcji między tymi czynnikami [F (2, 6) = 3,9; NS]. ** P <0,05 w porównaniu z PKC (3 + / + w tej samej dawce (test Bonferroniego). (C) wytwarzanie TNF - a stymulowanego (20 ng / ml) anionu ponadtlenkowego wykazało główne efekty leczenia [F (1, 224) = 236; P <0,0001], genotyp [F (l, 224) = 506; P <0,0001], a czas [F (6, 224) = 64,6; P <0,0001] z interakcją między tymi czynnikami [F (6, 224) = 14,7; P <0,0001]. P <0,05 w porównaniu z niestymulowanym PKC. . /. neutrofile i *** P <0,05 w porównaniu z niestymulowanym PKC + + + i stymulowanym PKC. . /. neutrofile w tym samym czasie (test Newmana Keulsa). (D) stymulowane przez fMLP uwalnianie laktoferyny (10 & M) różniło się według genotypu [F (l, 12) = 15,2; P = 0,0021] i leczenie [F (l, 12) = 89,01; P <0,0001] z interakcją między tymi czynnikami [F (l, 12) = 7,24; P = 0,0197]. P <0,05 w porównaniu z niestymulowanym PKC. . /. neutrofile i *** P <0,05 w porównaniu z niestymulowanym PKC + + + i stymulowanym PKC. . /. neutrofile (testy Bonferroniego). (E) immunoreaktywność izoenzymu PKC w neutrofilach. (F) Immunoreaktywność izoenzymu PKC określona przez analizę regresji stężeń białka i odpowiadające wartości OD w analizie Western (n = 3). Testy funkcji neutrofilów (A (D) przeprowadzono w trzech lub czterech powtórzeniach z co najmniej trzech zwierząt z każdego genotypu. Tabela Liczba krwinek przed i 45 dni po transplantacji szpiku kostnego Wymiana szpiku kostnego między PKC. WT i myszy zerowe odwracają fenotypy ich udaru. Aby wykazać in vivo, czy granulocyty obojętnochłonne przyczyniły się do różnic w uszkodzeniu reperfuzyjnym obserwowanym pomiędzy myszami PKC i myszy WT, potraktowaliśmy myszy obu genotypów całkowitym napromienianiem ciała, a następnie przeszczepiono szpik kostny z przeciwnego genotypu. Następnie myszy poddano godzinie niedokrwienia mózgu, a następnie 24 godziny reperfuzji. Myszy WT przeszczepione szpikiem kostnym PKC (3 wykazywały zmniejszoną wielkość zawału i poprawione wyniki neurologiczne w porównaniu z myszami PKCa-null przeszczepionymi szpikem od dawców WT (Figura 6, A (C). Ponadto liczba neutrofilów obecnych w korze mózgowej i prążkowiu była mniejsza u myszy WT, którym przeszczepiono szpik kostny PKC (3 w porównaniu z myszami PKCa-null przeszczepionymi szpikem od myszy WT (Figura 6, E i F). Przeżycie przeszczepionej tkanki weryfikowano na podstawie liczby krwinek 45 dni po transplantacji (tabela 1) i metodą immunoblotingu z anty-PKC. Ab (fig. 6D). Figura 6 Przeszczep szpiku kostnego odwraca fenotypy w PKC. WT i myszy zerowe. (A. C) Reprezentatywne obrazy wybarwionych TTC wycinków mózgu (A), rozmiarów zawału (B) i wyników neurologicznych (C) po przejściowym MCAO napromienionych myszy WT transplantowanych szpikiem kostnym PKC ([+ / + NULL ), n = 7] i napromieniowane myszy zerowe przeszczepione szpikiem WT [(. /. WT), n = 8]. (D) PKC. immunoreaktywność w komórkach szpiku kostnego od przeszczepionych myszy w celu potwierdzenia sukcesu przeszczepu szpiku kostnego. PKC. immunoreaktywność wykrywano w szpiku myszy WT (+ / +) i napromienionych myszy null przeszczepionych szpikiem WT (A / (WT), ale nie w myszach PKC (n / a) ani na napromieniowanych myszach WT po przeszczepieniu PKC . -null szpiku kostnego (+ / + NULL). Pokazane są próbki z jednej myszy WT, jednej myszy PKC. Null, dwóch myszy +/- NULL i dwóch myszy. /. WT. Próbki znormalizowano względem immunoreaktywności p-aktyny. (E i F) Liczba pozanaczyniowych neutrofili w korze niedokrwionej (E) i prążkowiu (F) napromieniowanych myszy WT po przeszczepieniu szpikiem kostnym PKC ([(+/ + NULL), n = 6] i napromienionym myszom zerowym przeszczepionym ze szpiku WT [(. /. WT), n = 6] po godzinie MCAO i 24 godzinach reperfuzji. * P <0,05 w porównaniu z kumplami z miotu WT. Dyskusja Uważamy, że to badanie jest pierwszym, które pokazuje, że PKC. jest głównym mediatorem uszkodzenia mózgu po przejściowym niedokrwieniu i reperfuzji u myszy. Nasze odkrycia dostarczają również wyraźnych dowodów na to, że PKC. pośredniczy w przyleganiu neutrofili, migracji, degranulacji i generowaniu nadtlenku. Upośledzona funkcja neutrofilów może zmniejszyć uszkodzenie mózgu po reperfuzji, co wykazano na przykład u myszy z niedoborem Mac-1 (CD11b / CD18) (20, 21) [hasła pokrewne: węglowodany złożone tabela, decoria galerie, fishing24 ] [patrz też: spaghetteria kobierzyńska, decoria galerie, studio urody 11 ]