Neutrofilowa kinaza białkowa C jako mediator urazu po reperfuzji ad

Wygenerowaliśmy myszy pozbawione PKC. z zastosowaniem rekombinacji homologicznej w komórkach ES (Figura 1). Ani pełnej długości ani skróconej immunoreaktywności PKCa-i nie wykryto w komórkach myszy n PKC w analizie Western blot (Figura 1D i dane nie pokazane). Myszy te nie wykazały żadnych wulgarnych lub mikroskopowych nieprawidłowości w układzie neuroanatomicznym ani defektów motorycznych podczas badań w otwartym polu lub na przyspieszającym rotarod (dane nie pokazane). Aby zbadać reakcję tych zwierząt na udar, po raz pierwszy zastosowaliśmy model trwałego niedokrwienia mózgu, w którym zawał w dystrybucji MCA jest wytwarzany przez zamknięcie światła naczynia szwem. Umieszczenie szwu przez 20 godzin spowodowało zawały mózgu o podobnej wielkości u myszy z mioteczką PKCa i WT z miotu (Figura 2, A i B). Badanie neurologiczne wykazało podobny stopień upośledzenia w obu genotypach 20 godzin po rozpoczęciu niedokrwienia (Figura 2C). Ponieważ permanentna okluzja, gdy jest ciężka, powoduje śmierć komórki, która jest głównie nekrotyczna (15), te odkrycia sugerują, że PKC. nie odgrywa istotnej roli w martwicy wywołanej niedokrwieniem. Biorąc pod uwagę dowody na PKC. jako mediator apoptozy, poddaliśmy myszy przejściowemu paradygmatowi niedokrwienno-reperfuzyjnemu, w którym apoptoza odgrywa ważną rolę w śmierci komórki (16). Interesujące jest, że rozmiar zawału był zmniejszony o około 65% u myszy z nietkniętym PKC w porównaniu z myszami z miotu WT (Figura 2, D i E) po godzinie niedokrwienia, a następnie 24 godzinach reperfuzji. Było to skorelowane z lepszym wynikiem neurologicznym u myszy. PKC. W porównaniu z myszami WT 24 godziny po okresie niedokrwienia (Figura 2F). Rozmiar zawału był bardziej zmniejszony w korze niż w prążkowiu myszy nk PKC (Figura 2, G i H). Atenuowany rozmiar zawału u myszy N-PKC nie był spowodowany opóźnieniem w postępie zawału, ponieważ wielkość zawału u myszy z nerek PKC po godzinie niedokrwienia i 7 dni reperfuzji była podobna do wielkości zawału mierzonej po 24 godzinach. reperfuzji (dane nie pokazane). Figura Generacja myszy pC PKC. (A) Organizacja myszy PKC. gen, konstrukt targetujący i allel powstały w wyniku rekombinacji homologicznej. Pola reprezentują ekson (123 pz) i ekson 2 (200 pz). Groty strzałek reprezentują sekwencje loxP. Wskazane są tylko odpowiednie miejsca restrykcyjne. E, EcoRI; H, Hindlll; B, BamHI; S, SacI; N, NotI. (B) Weryfikacja genotypów metodą PCR przy użyciu starterów P7 i P3. Allel WT (+ / +) generuje 2,9-kb i zmutowany allel (A / p) o wielkości 1,8 kb, jak wskazano. (C) Weryfikacja genotypów za pomocą analizy Southern blot genomowego DNA trawionego EcoRI z WT (+ / +), heterozygotycznych (+ /.) I homozygotycznych mutantów (A / P) przy użyciu 3,2 kb 5 (-probe (Hindlll) Fragment SacI). (D) Weryfikacja genotypów za pomocą analizy Western blot lizatów całego mózgu przy użyciu mAb przeciwko PKC .. Migracja PKC. wskazano immunoreaktywność (78 kDa). Figura 2 Rozmiar wirusa jest zmniejszony u myszy PKCa po przejściowym, ale nie stałym, MCAO. (A) Przedstawiono reprezentatywne obrazy skrawków mózgu barwionych TTC po 20 godzinach stałego MCAO z PKC. + / + I PKC. . /. myszy. Tkanka żywotna jest wybarwiona na czerwono, natomiast obszar niedokrwienia pozostaje nie wybarwiony (biały). (B) Rozmiar zawału mierzony jako procent obszaru nie-niedokrwiennej półkuli po 20 godzinach stałego MCAO z PKC. + / + (N = 8) i PKC. . /. myszy (n = 8). (C) Wyniki neurologicznego deficytu po 20 godzinach stałego MCAO z PKC. + / + (N = 8) i PKC. . /. myszy (n = 8). (D) Reprezentatywne obrazy wybarwionych TTC wycinków mózgu po godzinie MCAO i 24 godzinach reperfuzji z PKC + + i PKC. . /. myszy. (E) Całkowity rozmiar zawału po godzinie MCAO i 24 godziny reperfuzji od PKC. + / + (N = 10) i PKC. . /. (n = 9) myszy. (F) Wyniki neurologicznego deficytu po godzinie MCAO i 24 godziny reperfuzji z PKC. + / + (N = 8) i PKC. . /. myszy (n = 8). (G i H) Rozmiar zawału w korze mózgowej (G) i prążkowiu (H) po godzinie MCAO i 24 godzinach reperfuzji z PKC. + / + (N = 10) i PKC. . /. (n = 9) myszy. * P <0,05 w porównaniu z myszkami z miotu WT (dwustronny test t dla niepowiązanego). P <0,05 w porównaniu z krowami z miotu WT (jednostronny, niesparowany test t). Aby zbadać, czy osłabiona wielkość zawału u myszy z nK PKC była spowodowana zmianą w anatomii naczyń mózgowych, zbadaliśmy rozkład naczyń mózgowych za pomocą iniekcji tuszu w Indiach. Nie zaobserwowano różnic w pochodzeniu MCA lub innych dużych naczyń krwionośnych w kręgu Willisa (ryc. 3A). Dystrybucja obszaru MCA była również podobna u myszy WT i myszy PKC-Null (Figura 3, B i C). Dodatkowo mózgowy przepływ krwi był podobny w obu genotypach przed i podczas niedokrwienia i po reperfuzji (Rysunek 3D) [hasła pokrewne: motochemia, maseczka na włosy z siemienia lnianego, enterococcus faecalis w moczu ] [podobne: królestwo pierożka, pompon komis, pijalnia wódki i piwa kraków ]