Interakcje selektynowo-mucynowe jako prawdopodobne wyjaśnienie molekularne dla związku zespołu Trousseau z śluzowymi gruczolakorakami ad 7

Co zaskakujące, agregacja płytek pozostała niezmieniona, nawet gdy hamowaliśmy in vivo aktywność trombiny poprzez wspólne hirudynę z mucyną (patrz Figura 4a). Aby sprawdzić, czy hirudyna działa w warunkach in vivo, zbadaliśmy bardziej szczegółowo mikrourombi płytki krwi, szczególnie skupiając się na fibrynie (wskaźniku aktywności trombiny) oraz na płytkach krwi i leukocytach (Figura 4c). Podczas gdy hirudyna w tej samej dawce zapobiegała odkładaniu się fibryny w obrębie i wokół wszystkich mikroukładów kostnych, agregacja płytek nie uległa zmianie. Morfologia agregatów płytek krwi w obecności hirudyny wyglądała nieco inaczej, prawdopodobnie dlatego, że nici fibryny nie były dostępne do konsolidacji agregatów. Ponieważ mucyna spowodowała niewielką agregację płytek krwi u myszy z niedoborem selektyny (patrz Figura 3), następnie badaliśmy działanie heparyny i hirudyny u tych myszy. Hirudyna, z dodatkiem lub bez dodatku heparyny, nie wpływała na pozostałą niskostopniową agregację płytek w P-sella / P, L-sella / P, lub P-f lu / P / L-se1 A / r. myszy (dane nie pokazane). Podsumowując, dane te wskazują, że trombina nie jest komponentem proksymalnym w szlaku indukowanej mucyną agregacji płytek krwi w tym modelu in vivo. Przeciwnie, depozycja fibryny (wskaźnik aktywności trombiny) wydaje się być procesem wtórnym. Mucyny aktywują płytki krwi poprzez leukocytową L-selektynę w pełnej krwi. Ponieważ mucyny nie aktywują płytek krwi w buforze (34) lub w PRP (dane nie pokazane), a działanie mucyny in vivo było niezależne od trombiny i zależne od L-selektyny, postawiliśmy hipotezę, że leukocyty były zaangażowane w aktywację płytek krwi. Aby przetestować to in vitro, wymieszaną mysią krew pełną, antykoagulantem z hirudyną do hamowania trombiny inkubowano w 37 ° C z różnymi badanymi związkami przez 5 minut, a następnie wykrywanie cytometrii przepływowej i oznaczanie ilościowe aktywowanych płytek krwi przez testowanie ekspresji P-selektyny ( Figura 5). Zaobserwowano niski, ale znaczący stopień ekspresji P-selektyny, zgodny z aktywacją płytek krwi za pośrednictwem leukocytów, a nie bezpośrednią stymulacją płytek krwi (70). Podczas gdy preparaty mucynowe aktywowały płytki krwi w pełnej krwi typu dzikiego, były one nieaktywne w pełnej krwi z L-sel. /. myszy. Ponadto heparyna całkowicie zablokowała działanie mucyny w krwi dzikiego typu. Ponieważ hirudyna jest już stosowana w ilości wysycającej, heparyna prawdopodobnie działa przez swoją rolę jako inhibitor interakcji P i / lub L-selektyny, a nie jako inhibitor trombiny. Końcowe stężenie mucyny stosowane w tym układzie in vitro było w przybliżeniu takie samo, jak przewidywane w doświadczeniach in vivo. Na podstawie tych wyników wyciągamy wniosek, że mucyny wymagają selektyny L-selektyny, aby aktywować płytki krwi, powodując ekspresję selektyny P (patrz dyskusja poniżej). Figura 5 Pokazanie in vitro istotnej roli selektyny L leukocytowej w pośredniczeniu w aktywacji płytek krwi. Cytometria przepływowa w ocenie ilościowej aktywacji płytek krwi na podstawie ekspresji P-selektyny w mieszanej, pełnej krwi hirudynie. Czarne pręty, krew myszy typu dzikiego; szare paski, L-sel. /. mysia krew. Wartości reprezentują średnią. SEM (n = 3); * P = 0,007 względem kontrolnych traktowanych PBS; ** P = 0,003 w stosunku do krwi dzikiego typu leczonej mucyną. Myszy z guzami produkującymi mucyn wykazują dowody na zespół Trousseau. Niektóre myszy niosące ksenoprzeszczepy, z których usunięto mucynę do bieżących badań, wykazywały kliniczne objawy niedokrwistości hemolitycznej z mikroangiopatią (Tabela 2). Były niedokrwiste, miały umiarkowane ilości krążących uszkodzonych czerwonych krwinek (schistocytów) i miały dużą liczbę młodych krwinek czerwonych (polichromatofilne makrocytów, zgodne z hemolizą i wyrównawczą erytropoezą) Chemia w surowicy wykazała zwiększoną LDH i bilirubinę, zgodnie z procesem hemolitycznym Analiza histologiczna płuc wykazała łagodne lub ciężkie rozsiewane mikroukłady z płytkami krwi u niektórych myszy, ale wiele dalszych badań będzie oczywiście potrzebnych do udowodnienia, że wyniki potwierdzające u tych zwierząt są rzeczywiście związane z mucynami z krążącego guza i aby je przedłużyć. obserwacje u ludzi chorych na raka Tabela 2 Charakterystyka mikohistiopatyczna u myszy z guzami śluzowymi Dyskusja Wykazaliśmy, że same mucyny mogą aktywować płytki krwi i generować klasyczną mikroangiopatyczną postać zespołu Trousseau u nietkniętych myszy, co stanowi racjonalne wyjaśnienie wcześniej tajemniczego związku Trousseau zespół z mucin-produci ng rakach. Nasza pierwotna hipoteza, że TF była wymagana do działania mucyny jako matrycy i agregacji aktywowanych płytek krwi przez P-selektynę, nie była uzasadniona i byliśmy zaskoczeni, że L-selektyna była również niezbędna.
[hasła pokrewne: operacje plastyczne piersi, trufla kraków, legato motocykle ]
[więcej w: vanilla komis, cukiernia michalscy, centrum tanich podręczników ]