Interakcje selektynowo-mucynowe jako prawdopodobne wyjaśnienie molekularne dla związku zespołu Trousseau z śluzowymi gruczolakorakami ad 6

Mikrothrombi można było zaobserwować z zaledwie 50 .g mucyny wstrzykniętej na mysz (dane nie przedstawione), co równa się stężeniu w osoczu około 50 .g / ml (przy założeniu, że mysia objętość osocza wynosi około ml). Warto zauważyć, że niektórzy pacjenci z chorobą nowotworową mogą mieć stężenie mucyny w krążeniu tak wysokie, jak około 100 .g / ml (jak określono za pomocą testu immunologicznego CA 19-9, który wykrywa epitopy sialyl Lewis A przenoszone na mucyny) (67, 68). Fig. 2 Przebieg czasowy mikroukładów bogatych w płytki krwi w płucach myszy typu dzikiego po pojedynczym wstrzyknięciu mucyny. (a) Typowe reprezentacje in vivo płytek mikroukładów bogatych w płytki krwi w skrawkach płuc obserwowanych za pomocą fluorescencyjnie znakowanych Ab przeciwko markerowi płytek krwi, CD41. (b) Ilościowe oznaczenie histologiczne, określające średnią liczbę pikseli pozytywnych dla CD41 na pole widzenia 200 × (średnia wartość 20 pól losowych). Każdy pasek reprezentuje średnią. SEM. * P <0,001 w porównaniu z myszami, którym wstrzyknięto PBS, n = 7; ** P <0,05, n = 5. Działanie in vivo mucyny zależy od P-selektyny i L-selektyny. Aby określić, czy selektyny odgrywają rolę w odpowiedzi in vivo na wstrzyknięte mucyny, powtórzyliśmy iniekcje mucyny u myszy typu dzikiego w porównaniu z myszami z niedoborem selektyny. Jak pokazano na fig. 3, prawie wszystkie kapilary pęcherzykowe u myszy typu dzikiego zajęły małe agregaty płytek krwi. Duże skupiska zajmowały również niektóre średniej wielkości żyły. W przeciwieństwie do tego, iniekcja mucyny myszom z niedoborem P lub L selektyny dała niewielkie niewielkie agregaty, które były ledwo powyżej poziomów tła. Myszy z połączonym niedoborem obu selektyn nie wykazywały dodatkowego tłumienia ponad to, co obserwowano z niedoborem pojedynczej selektyny. Tak więc efekt mucyny musi działać poprzez liniowy szlak obejmujący zarówno selektynę P i L. Nie badaliśmy roli E-selektyny w tym układzie, ponieważ nie jest ona normalnie obecna na śródbłonku, ale musi być aktywowana transkrypcyjnie przez określone bodźce (69). Rycina 3 Niedobór Selektyny osłabia tworzenie płytek krwi bogatych w płytki po wstrzyknięciu mucyny. (a) Typowe reprezentacje mikroukładów bogatych w płytki krwi w skrawkach płuc obserwowanych jak na Figurze 2, 5 minut po wstrzyknięciu. (b) Ilościowe oznaczanie CD41 w przekrojach płucnych jak na rycinie 2. Przedstawione wartości przedstawiają średnią. SEM. * P <0,001 w porównaniu z myszami dzikiego typu, którym wstrzyknięto mucyną, n = 7; ** P <0,05, n = 7. Białe słupki, myszy z wtryskiem PBS; czarne paski, myszy, którym wstrzyknięto mucynę. Poza działaniem antykoagulacyjnym heparyna blokuje również interakcje P i L-selektyny (57). Rzeczywiście, ostatnie prace sugerują, że większość lub wszystkie przeciwzapalne działanie heparyny można wyjaśnić blokadą selektyny (59). Zgodnie z tym stwierdziliśmy, że wstrzyknięcie heparyny na 15 minut przed wstrzyknięciem mucyny znacząco zmniejszyło mikroukłady z bogatym w płytki u myszy typu dzikiego (Figura 4a). Ta ochronna rola heparyny u myszy typu dzikiego może być również spowodowana jej aktywnością antytrombina / antykoagulant. W następnej kolejności zbadaliśmy rolę trombiny, próbując rozplątać składnik koagulacji w fazie płynnej od komponentu selektyny. Ryc. 4. RELatywne znaczenie koagulacji w fazie ciekłej w stosunku do selektyny w indukowanym mucyną tworzeniu się mikrouszkodzeń. (aib) Ilościowe oznaczanie CD41 w sekcjach płuc jak na Figurze 2, 5 minut po wstrzyknięciu. (a) Zdolność heparyny lub hirudyny do blokowania działania mucyny u myszy typu dzikiego. * P <0,05 w porównaniu z samą mucyną, n = 5; ** P <0,001 w porównaniu z myszami, którym wstrzyknięto PBS, n = 5 (b) Efekty progowego poziomu trombiny z mucyną. (c) Trzykolorowa immunofluorescencyjna analiza mikroprzepętów bogatych w płytki krwi u myszy typu dzikiego, którym wstrzyknięto mucynę (z lub bez hirudyny) w celu wykazania fibryny, wskaźnika aktywności trombiny. Jasnozielony wskazuje na zdeponowaną fibrynę; bladozielona wskazuje na autofluorescencję powierzchni prześwitu wzdłużnej przekroju żyły; czerwony wskazuje płytki; a niebieski wskazuje jądro. Pokazano przykłady zamknięcia mikroukładów i rozproszonych agregatów płytek krwi. Początkowa agregacja płytek krwi jest niezależna od aktywności trombiny. Nasza pierwotna hipoteza (oparta na danych in vitro) głosiła, że TF pochodzący z nowotworu może generować niskie poziomy trombiny, które następnie wytwarzają krążącą populację płytek z eksponowaną selektyną P. Mucyny następnie agregują te płytki przez sieciowanie P-selektyny, być może rozpoczynając pętlę sprzężenia zwrotnego i rekrutując dodatkowe płytki do agregatów. Aby zbadać tę możliwość, subprogowe poziomy trombiny zostały połączone z mucyną. Jednak wpływ trombiny był raczej dodatni niż synergistyczny (ryc. 4b) [przypisy: węglowodany złożone tabela, legato motocykle, trufla kraków ] [podobne: spaghetteria kobierzyńska, decoria galerie, studio urody 11 ]