Geny związane z uczuleniem macicy a 1 (USAG-1), nowy antagonista BMP eksprymowany w nerce, przyspiesza uszkodzenie rurki ad

Chociaż występowały różnice w miejscach dodatkowych zębów i zrośniętych zębów, fenotyp zębów był w pełni penetrujący. Zużycie pokarmu nie zostało zaburzone przez ten fenotyp zębów w USAG1. /. myszy (dane nie pokazane). Rysunek Generacja USAG1. /. mutacja przez celowanie genowe. (A) Allel USAG1. Null wytworzono przez rekombinację homologiczną w komórkach ES. Exon (czarna ramka) i część intronu zostały zastąpione genem lacZ (białe pudełko) i kasetą NeoR (szare pudełko). (B) Analiza USAG1 + / + (WT) i prawidłowo ukierunkowanych heterozygotycznych (Hetero) klonów komórek ES za pomocą analizy Southern blot przy użyciu 5. sonda genomowa (gruba czarna linia w A). (C) Genotypowanie PCR miotów F2. Szablon (.) To kontrola negatywna. (D) Analiza Northern blot mRNA USAG1 w nerce USAG1 + / + i USAG1 (3 / /. (KO) myszy. Atenuowane ostre uszkodzenie cewek w USAG1. /. myszy. Aby wywołać ostre uszkodzenie cewek, wykorzystaliśmy model nefrotoksyczności cisplatyny (22. 24). Podawanie środka nefrotoksycznego, cisplatyny, myszom z rodzaju dzikiego powodowało ostre uszkodzenie cewek, które spowodowało ciężką niewydolność nerek. W ciągu pierwszych 3 dni zmarło 54% myszy typu dzikiego, podczas gdy 92% z USAG1. /. myszy przeżyły okres (Figura 2A). Funkcja nerek w USAG1. /. myszy w dniu 3 były znacząco zachowane w porównaniu z myszami z rodzaju dzikiego (fig. 2B). Badanie histologiczne nerek myszy typu dzikiego w dniu 3 wykazało ciężkie proksymalne uszkodzenia kanalikowe, podczas gdy zmiana ta była znacznie zmniejszona w USAG1. /. myszy (Figura 2, C i D). Ekspresja E-kadheryny, markera dla integralności nabłonka rurkowatego (25), była znacznie zmniejszona w nerkach myszy typu dzikiego, podczas gdy jej ekspresja została zachowana w USAG1 (3). myszy (Figura 2E). Ropna apoptoza, charakterystyczna cecha uszkodzenia cewek nerkowych w nefrotoksyczności cisplatyny (23), była również znacznie zmniejszona w USAG1. /. myszy (Figura 2F). Jak podano wcześniej (24), podawanie cisplatyny spowodowało zwiększenie ekspresji TNF-a, IL-ip, monocytowego chemotaktycznego białka-1 (MCP-1), TGF-pi i typu IV kolagenu w nerce typu dzikiego. myszy. Jednak indukcja tych genów została całkowicie zniesiona w USAG1. /. myszy (Figura 2G). Infiltracja makrofagów i monocytów w nerce również została znacznie zmniejszona w USAG1. /. myszy (Figura 2H), zgodnie ze zmniejszeniem ekspresji MCP-1 (Figura 2G). Ekspresja BMP-7 była porównywalna między myszami typu dzikiego i USAG1. /. myszy przed i po wstrzyknięciu cisplatyny (Figura 2G). Rysunek 2USAG1. /. myszy wykazywały mniejsze uszkodzenie nerek w nefrotoksyczności cisplatyny. (A) Krzywe przeżycia myszy typu dzikiego (czarna linia) i USAG1. /. myszy (czerwona linia) po podaniu cisplatyny (n = 24). (B) Stężenie kreatyniny w surowicy (Cre) i azotu mocznikowego we krwi w 3 dni po wstrzyknięciu cisplatyny (n = 6). (C) Reprezentatywne wyniki histologiczne nerki u myszy typu dzikiego i USAG1a /. myszy w dniu 3. Pręty skali: 100 .m. (D) Półilościowa ocena morfologicznego uszkodzenia nerek wyrażona jako względna ostrość w skali od 0 do 4 (n = 6). Odkształcenia morfologiczne oceniano zgodnie z ubytkiem granicy proksymalnej tubulki (utrata BB), dylatacją kanalików (dilatacja), zwyrodnieniem kanalików (zwyrodnienie) i martwicą kanalików (martwica). * P <0,01; ** P <0,001. (E) Ekspresja e-kadheryny w nefrotoksyczności cisplatyny. Lizaty nerki poddano immunoblottingu z przeciwciałem anty-E-kadheryny. Przedstawiono reprezentatywne dane z 4 niezależnych eksperymentów. (F) Barwienie TUNEL nerek w 3 dniu nefrotoksyczności cisplatyny. Liczbę komórek TUNEL-dodatnich w każdej sekcji zliczono w przekrojach poprzecznych (n = 6). Paski skali: 10 .m. (G) Ekspresja genu w nefrotoksyczności cisplatyny. Ekspresję genu oznaczono metodą RT-PCR w czasie rzeczywistym. W każdym doświadczeniu poziomy ekspresji znormalizowano względem ekspresji GAPDH i wyrażono względem myszy w dniu 0. n = 4. 6 dla każdego eksperymentu.