Geny związane z uczuleniem macicy a 1 (USAG-1), nowy antagonista BMP eksprymowany w nerce, przyspiesza uszkodzenie rurki ad 8

Seryjnie rozcieńczony cDNA lub plazmidy kodujące sondy do hybrydyzacji in situ zastosowano do wygenerowania standardowej krzywej dla każdego startera, a warunki PCR były następujące: 50 ° C przez 2 minuty, 95 ° C przez 10 minut, następnie 95 ° C przez 15 minut. sekund i 60 ° C przez minutę przez 40 cykli. Tabela Primery do RT-PCR w czasie rzeczywistym Podawanie neutralizującego przeciwciała przeciw BMP-7. W nefrotoksyczności cisplatyny, wstrzyknięto dootrzewnowo 1,5 mg / kg przeciwciała anty-BMP-7 (R & D Systems Inc.) do USAG1 (3). myszy 24 godziny po wstrzyknięciu cisplatyny. W UUO, 0,5 mg / kg neutralizującego przeciwciała anty-BMP-7 wstrzykiwano co 3 dni od dnia 2 do dnia 11. Jako kontrolę negatywną, w tych samych punktach czasowych wstrzykiwano izotypowo dobraną IgG2B (BD Biosciences). Aktywność neutralizującą przeciwciała oceniano za pomocą testu mierzącego wytwarzanie aktywności fosfatazy alkalicznej przez komórki C2C12, jak opisano wcześniej (21). Hybrydyzacja in situ. Nerki wycięto z dorosłych samców myszy i utrwalono w 4% paraformaldehydzie w PBS. Zamrożone skrawki (o grubości 5 urn) traktowano ug / ml proteinazy K w PBS w 37 ° C przez 30 minut i acetylowano w 0,1 M roztworze chlorowodorku trietanoloaminy, 0,25% bezwodnika octowego przez 15 minut. Przeprowadzono hybrydyzację z sondami o stężeniach około .g / ml w roztworze do hybrydyzacji (50% formamid, × 5 SSC, 1% SDS, 50 .g / ml przenoszącego RNA i 50 .g / ml heparyny) przy 60 ° C przez 16 godzin. Sondy RNA zsyntetyzowano przez transkrypcję in vitro za pomocą DIG RNA Labeling Mix (Roche Diagnostics Corp.). Każda sonda została zaprojektowana tak, aby zawierała otwartą ramkę odczytu o następującej długości i zawartości G + C: USAG-1, 1,0 kbp (G + C 52,6%); sklerostyna, 1,5 kbp (61,7%); coco, 1,2 kbp (54,7%); DAN, 1,0 kbp (60,6%); skręcona gastrulacja, 0,7 kbp (55,1%); PRDC, 0,8 kbp (57,7%); chordin, 1,5 kbp (60,2%); gremlin, 0,9 kbp (50%); noggin, 0,7 kbp (64,7%); cerberus, 1,5 kbp (48,8%). Hybrydyzację wykrywano stosując koniugat anty-DIG AP (Roche Diagnostic Corp.) i roztwór NBT / BCIP (Roche Diagnostics Corp.). Analiza fenotypu zębów dorosłych. Preparaty szkieletowe szczęki i żuchwy wytworzono przez namoczenie głów myszy w 0,02% proteinazy K w PBS w 37 ° C przez 4 dni po oderwaniu skóry, przecięciu szczęki i żuwaczek i oczyszczeniu w 5% H2O2 w temperaturze pokojowej. na 5 minut. W końcu przepłukano je H2O i pozostawiono do wyschnięcia. Statystyka. Wszystkie testy przeprowadzono w trzech powtórzeniach. Dane są przedstawione jako średnie. SD. Istotność statystyczną oceniano za pomocą ANOVA, a następnie testem post-hoc chronionym co najmniej znaczącą różnicą Fishera. Krzywe przeżycia uzyskano za pomocą metody Kaplana-Meiera i porównano za pomocą testu log-rank. Materiały uzupełniające Zobacz Dodatkowe dane Podziękowania Jesteśmy wdzięczni Y. Nabeshimie, T. Nakahacie i T. Nakamurze za pomocną dyskusję. Jesteśmy wdzięczni M. Yoshimoto za ocenę hematologiczną myszy. Dziękujemy A. Godo, H. Uchiyamie i A. Hosoya za pomoc techniczną. Dziękujemy W. Grayowi za przeczytanie rękopisu. Przypisy Niestandardowe skróty: BMP-7, białko morfogenetyczne kości. 7; EMT, przejście nabłonkowo-mezenchymalne; MCP-1, białko chemotaktyczne monocytów-1; PTEC, komórka nabłonka kanalika proksymalnego; USAG1, gen związany z uczuleniem macicy a 1; UUO, jednostronna niedrożność moczowodu. Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów. Informacje referencyjne: J. Clin. Invest.116: 70. 79 (2006). doi: 10,1172 / JCI25445
[hasła pokrewne: kalkulator makroskładników, deli 8, pijalnia wódki i piwa kraków ]
[hasła pokrewne: deli 8, well done kraków, motochemia kraków ]