Dożywotnia ekspozycja na rozpuszczalny TGF- antagonista chroni myszy przed przerzutami bez niepożądanych skutków ubocznych ad 5

Western bloty ekstraktów gruczołu sutkowego z myszy typu dzikiego lub transgenicznych (TG) sondowano anty-ludzkim przeciwciałem Fc (anty-huFc), z dodatkiem lub bez nadmiaru ludzkiej immunoglobuliny G1 (huIgG) w celu wykazania swoistości. Oczyszczony SR2F był kontrolą pozytywną. (d) poziomy białka SR2F w surowicy i tkankach myszy transgenicznych. Surowice i wyciągi z tkanki od 2,5-miesięcznych myszy transgenicznych z pierwszego tłoczenia testowano na białko SR2F. Wyniki są średnie. SD dla trzech myszy każdej płci. (e) Stabilność in vivo SR2F. Stężenia SR2F w surowicy u potomstwa typu dzikiego hemizygotycznych transgenicznych matek określano w różnych czasach po urodzeniu. Okres półtrwania (T1 / 2) SR2F w surowicy obliczono z krzywej zaniku. (f) Zdolność SR2F w transgenicznej surowicy do wiązania TGF-pi. Surowicę z myszy typu dzikiego lub transgenicznych badano pod kątem TGF-a. wiązania białek za pomocą sieciowania powinowactwa ligandu z 125I (TGF-pi. Oczyszczone SR2F wzbogacone w sól fizjologiczną lub surowicę typu dzikiego stanowiły kontrole dodatnie. Mam gl., Gruczoł mleczny; Sal. Gl., Gruczoł ślinowy; Mes. LN, krezkowy węzeł chłonny; Sal. gl, gruczoł ślinowy; Sm. int., jelita cienkiego; SV, pęcherzyk nasienny; MWM, markery masy cząsteczkowej; A 2M, P 2-makroglobulina. Mysz MMTV-SR2F jest chroniona przed przerzutami w systemie modelu przerzutowego żyły ogonowej. Kilka badań wskazuje, że TGF-ys są czynnikami prometastycznymi (29. 31). Aby określić, czy ekspresja SR2F będzie chroniła przed eksperymentalnymi przerzutami, kohorty odpowiadające wiekowi 3- do 4-miesięcznego męskiego MMTV-SR2F i myszy kontrolnych FVB / NCr typu dzikiego były prowokowane przez wstrzyknięcie izogenicznej przerzutującej linii komórek czerniaka 37 -32 do żyły ogonowej. Statystycznie istotny spadek liczby rażąco wykrywalnych przerzutów do wątroby zaobserwowano u myszy MMTV-SR2F zarówno w 28, jak i 35 dni po wstrzyknięciu komórek (Figura 3a). W analizie histologicznej myszy MMTV-SR2F wykazały dwu- do trzykrotny spadek liczby przerzutów na narząd dla wszystkich miejsc przerzutowych po 35 dniach (Figura 3b). W przypadku wątroby, która była miejscem najbardziej skolonizowanym, różnica była statystycznie istotna (P = 0,03 w teście t Studenta dla niezależnych próbek). W osobnym eksperymencie z użyciem 7-tygodniowych myszy, u których poziomy krążących SR2F różniły się dość szeroko wśród kohorty transgenicznej ze względu na zmienny transfer matczyny, wystąpiło zależne od dawki zmniejszenie liczby przerzutów do wątroby wraz ze wzrostem poziomów krążącego SR2F ( Figura 3c). Figura 3 Wpływ SR2F na wydajność przerzutową w teście iniekcji w żyle ogonowej. (a) Makroskopowo wykrywalne przerzuty do wątroby w różnym czasie po inokulacji. Myszy typu dzikiego lub transgeniczne (SR2F) wstrzyknięto do żyły ogonowej 106 izogenicznych 37-32 komórek czerniaka. Po 21, 28 i 35 dniach myszy poddano sekcji i ilościowo zmierzono liczbę widocznych makroskopowo przerzutów na powierzchni wątroby. 21-dniowy punkt czasowy miał pięć myszy na grupę genotypową, podczas gdy pozostałe punkty czasowe miały dziesięć myszy na grupę genotypową. (b) Wpływ na skuteczność przerzutów w różnych narządach wewnętrznych. Liczbę histologicznie oczywistych przerzutów oznaczono ilościowo we wszystkich tkankach, które wykazały dowody przerzutów do mózgu u myszy poddanych nekropsji w 35 dni po inokulacji. Dwa reprezentatywne przekroje każdego płata zostały ocenione dla wątroby, a jeden reprezentatywny przekrój analizowano dla innych narządów. Zastosowano dziesięć myszy na grupę genotypów. (c) zależność od dawki wpływu SR2F na skuteczność przerzutów. W powtórzonym doświadczeniu opisanym w a, liczba histologicznie wykrywalnych przerzutów w reprezentatywnych przekrojach wątroby została określona ilościowo i wykreślona względem krążących poziomów SR2F, jak zmierzono przez kanapkowy test ELISA na surowicy przygotowanej podczas sekcji. Dane dla kohorty typu dzikiego (0 ng / ml SR2F) są przedstawione jako średnie. SD (n = 4). R reprezentuje współczynnik korelacji dla dopasowania krzywej liniowej. Antagonista SR2F chroni przed przerzutami z pierwotnego guza sutka bez wpływu na rozwój guza pierwotnego. W celu określenia, czy antagonista SR2F był skuteczny w ochronie przed przerzutami z guza pierwotnego powstającego w jego naturalnym miejscu, przeszliśmy przez myszy MMTV-SR2F lub kontrolują myszy FVB / NCr modelem myszy MMTV-neu z przerzutowym rakiem sutka (32). W tym modelu inicjuje się nowotworzenie sutka przez nadekspresję homologu szczura protoonkogenu HER2 / erbB2 / neu. Ponieważ TGF-. Uważa się, że działa on jako supresor guza we wczesnych etapach onkogenezy, chcieliśmy również ustalić, czy wystąpiły jakieś niepożądane działania promujące nowotwór po długotrwałej ekspozycji na TGF-a. antagonista podczas wszystkich etapów onkogenezy
[podobne: nova krova, biustonosz sportowy nike, motochemia ]
[przypisy: nova krova, pod norenami, spaghetteria kobierzyńska ]